甲醛和过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的毒性作用

作     者：刘延君 

作者单位：汕头大学 

学位级别：硕士

导师姓名：罗文鸿

授予年度：2005年

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：内源性甲醛 H2O2 人脐静脉内皮细胞 彗星电泳 K-SDS沉淀法 DNA断裂 DNA-蛋白质交联 高效液相色谱 SSAO 

摘      要：甲醛是公认的环境致癌物,自从Rapoporty1946年首次报道了甲醛具有致突 变作用以来,人们对甲醛的致癌性、致突变性做了大量研究。至今,绝大多数研 究都集中在外源性甲醛即环境污染物。近年来有学者提出内源性甲醛可能是启动 内皮细胞损伤,导致动脉硬化的潜在危险因素之一。人体内血液、尿液及组织中 存在的少量甲胺,可以通过氧化脱氨产生内源性甲醛和等摩尔的过氧化氢 (HO)。本研究以人脐静脉内皮细胞株CRL-2480为研究对象,采用彗星电泳法 和K-SDS法检测甲醛、HO、等摩尔甲醛和HO对血管内皮细胞DNA的损伤 作用,并采用高效液相色谱法初步检测该细胞株是否存在氨基脲敏感胺氧化酶 (SSAO)活性。 主要研究内容和方法: 一、取人脐静脉内皮细胞与不同浓度(0、5、10、25、50、100μmol/L)甲醛、HO、 甲醛和HO共同孵育20min,或与25μmol/L,甲醛、HO、甲醛和HO孵育不 同时间(0、10、20、30min)后,采用彗星电泳法检测DNA断裂损伤,荧光显微 镜下观察、照相,对彗星尾距进行测量和分析。 二、取人脐静脉内皮细胞与不同浓度(0、10、50、100、500、1000、2000μmol/L) 甲醛、甲醛和HO孵育1.5h或50μmol/L、100μmol/L浓度甲醛、甲醛和HO 孵育不同时间(0、0.5、1、1.5、2、4h),用改良K-SDS沉淀法测定各组细胞DNA 一蛋白质交联(DPC)率。 三、 取人脐静脉内皮细胞,PBS液洗涤,细胞铲刮离细胞收集离心,超声破碎 细胞。最后一次的PBS洗涤液、离心液上清、细胞悬液分别与苯甲胺37℃孵育 1h,与衍生化试剂45℃作用15min后,乙酸乙酯萃取2次,收集上清N气吹干, 残渣溶解过滤,用高效液相色谱法检测SSAO活性。 研究结果: 一、 浓度为0、5、1O、25、50、100μmol/L甲醛作用20min,彗星尾距(x|-±s) 分别为0.032±0.018、0.272±0.229、0.328±0.278、0.343±0.309、0.035±0.051、 0.037±0.076,5～25μmol/L,甲醛引起彗星尾距增大(P0.05):浓度为0、5、10、 25、50、100μmol/LHO作用20min,彗星尾距(X|-±s)分别为0.032±0.018、4.83