植物乳杆菌对大肠杆菌致猪肠上皮细胞损伤的保护作用研究

作     者：曾燕霞 

作者单位：甘肃农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郑琛;季海峰;王晶

授予年度：2017年

学科分类：090502[农学-动物营养与饲料科学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：植物乳杆菌 大肠杆菌 猪肠上皮细胞 损伤 保护作用 

摘      要：乳酸菌作为一种重要的益生菌,可发挥其益生作用改善仔猪肠道健康,缓解大肠杆菌等致病菌引起的腹泻,但其作用机理仍在探究当中。本试验以猪肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IPEC-J2细胞)为体外培养模型,研究了植物乳杆菌在外源致病菌大肠杆菌存在时,对IPEC-J2细胞的黏附、存活及免疫应答的影响。试验一研究了植物乳杆菌对IPEC-J2细胞的黏附以及对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的抑制作用;试验二研究了植物乳杆菌对大肠杆菌感染IPEC-J2细胞形态和存活的影响;试验三研究了植物乳杆菌对大肠杆菌感染IPEC-J2细胞免疫应答的影响。试验结果表明:试验一植物乳杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的影响:107、108、109CFU/mL浓度的植物乳杆菌均能黏附于IPEC-J2细胞,能够通过竞争、排阻和置换方式抑制大肠杆菌对IPEC-J2细胞的黏附,且具有浓度效应。不同浓度植物乳杆菌对大肠杆菌的黏附抑制均表现为活菌数越高,抑制作用越明显(P0.05)。从总体抑制方式看,竞争和置换抑制效果优于排阻抑制。试验二植物乳杆菌对大肠杆菌感染IPEC-J2细胞形态及存活的影响:107、108 CFU/mL浓度的植物乳杆菌在处理细胞1、2、3 h后,均不影响细胞的形态和存活,而109 CFU/mL浓度植物乳杆菌处理细胞较长时间后,对细胞形态及存活有一定影响;植物乳杆菌和大肠杆菌共培养发现,植物乳杆菌能够缓解大肠杆菌引起的细胞形态损伤及死亡,其中108 CFU/m L浓度的植物乳杆菌作用效果最优。试验三植物乳杆菌对大肠杆菌感染IPEC-J2细胞免疫应答的影响:植物乳杆菌处理细胞后,可促进细胞NOD1(2 h,P0.01)和NOD2(1 h,P0.01)mRNA的表达;植物乳杆菌可以显著抑制大肠杆菌引起的IPEC-J2细胞TLR2、TLR6、NOD2及炎症因子IL6、IL8、TNFαmRNA的过表达(P0.05)。