依达拉奉对EAE大鼠的干预作用及iNOS、OPN的表达影响

作     者：汤熠 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：魏麓云

授予年度：2011年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 依达拉奉 诱导型一氧化氮合酶 骨桥蛋白 

摘      要：目的:研究依达拉奉对实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）大鼠的作用机制和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）在EAE发病中的作用,为治疗多发性硬化（multiple sclerosis,MS）寻找新的途径。 方法: 将72只健康成年雌性Wistar大鼠随机分为:正常组（N组）、EAE组、小剂量依达拉奉组（LDE组,4 mg/kg.d）、大剂量依达拉奉组（HDE组,10 mg/kg.d）,每组18只。各组又随机分为7天、14天、21天处死的三个亚组,每个亚组6只大鼠。EAE组、LDE组、HDE组大鼠均需制备EAE模型。将新鲜豚鼠脊髓制成匀浆,加上完全弗式佐剂（Complete Freund,s adjuvant,CFA）（含卡介苗10mg/ml）,经过乳化后按0.5ml/只分别于大鼠四肢足垫和背部皮下注射,同时在大鼠四肢足背注射百日咳杆菌0.4ml/只,诱导EAE模型。EAE组不做任何处理,其余三组于模型制备第一天起腹腔注射相应剂量的药物,每天一次至处死为止。比较各组发病率并行神经功能评分,取脊髓组织行HE染色、iNOS、OPN免疫组织化学染色观察。 结果: 1.动物发病率观察:N组中无大鼠发病;EAE组发病率为:83.33%;LDE组、HDE组大鼠发病率均明显低于EAE组（P 0.05）;而且HDE组发病率低于LDE组（P 0.05）。 2.行为学观察:在免疫第14天时各组大鼠神经功能评分比较,N组、LDE组、HDE组评分均小于EAE组（P 0.05）。 3.组织病理学观察:N组无炎性细胞浸润外,其他组大鼠脊髓中均存在炎性细胞浸润。在疾病开始时EAE组大鼠组织内即出现炎性细胞浸润,且炎性细胞数目的多少与疾病严重程度相一致。在免疫第14天时N组、LDE组、HDE组炎性细胞浸润数均明显低于同期的EAE组（P 0.05）,HDE组炎性细胞浸润数小于LDE组,差异有统计学意义（P 0.05）;在免疫第21天时N组、HDE组炎性细胞浸润数与同期的EAE组之间比较均减少（P 0.05）。 4. iNOS和OPN表达: N组大鼠脊髓中无iNOS、OPN表达阳性细胞;其他组大鼠脊髓中均存在iNOS、OPN表达阳性细胞。在免疫第14天时N组、LDE组和HDE组中iNOS、OPN表达阳性细胞数与同期EAE组比较明显减少（P 0.05）;HDE组中iNOS、OPN阳性表达细胞数均低于LDE组（P 0.05）。 结论: ***大鼠中iNOS和OPN的表达与EAE的活动性呈正相关。 2.依达拉奉在EAE发病前干预能减少EAE发病,减轻发病程度。 3.依达拉奉对EAE具有保护作用,与清除自由基、减轻炎症反应、减少iNOS和OPN表达有关。