重组CHO细胞的无血清悬浮培养

作     者：张大鹤 

作者单位：华东理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙祥明;易小萍

授予年度：2011年

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：无血清培养 CHO细胞 流加培养 

摘      要：本文在无血清培养基SFMC的基础上,替代其中的动物源成份,开发了无动物源、无蛋白培养基PF-1,并进一步开发出化学成份确定的培养基CDM-1。这两种培养基化学成份简单,制备方便,能很好的支持重组CHO细胞的生长。 使用PF-1和CDM-1培养基在摇瓶中成功培养了CHO细胞。在PF-1培养基中,最高细胞密度可达到9.3×106 cells/ml,比HyQ(?) CHO-PF中培养时提高了219%。在CDM-1培养基中,最高细胞密度可达到7.3×106 cells/ml,比GIBCO CD-CHO⑧中培养时提高了47%。并且细胞在PF-1和CDM-1中培养时产生的毒性代谢副产物很少。 在1.5 L搅拌式生物反应器中使用PF-1培养基悬浮批培养和流加培养重组CHO细胞,最大细胞密度分别为8.0×106 cells/ml和8.1×106 cells/ml,蛋白表达量分别为35.3mg/L和115mg/L。流加培养过程中营养物质维持是关键,通过优化PF-1悬浮培养的流加培养基,培养时间明显延长,蛋白表达量因此提高了64.3%。使用商业化培养基流加培养细胞时,利用该策略优化流加培养基之后蛋白表达量也提高了26.3%。