杜梨叶黄酮类化合物提取、纯化及抗氧化性的研究

作     者：雷林芳 

作者单位：湖南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：钟晓红

授予年度：2009年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：杜梨叶 黄酮类化合物 提取 纯化 抗氧化性 

摘      要：黄酮类化合物在自然界中分布广泛,主要存在于植物的叶片和果实中。黄酮类药物具有抗脑缺血、抗心肌缺血、抗心律失常、镇痛、保肝护肝、对消化性溃疡的保护、抗病毒、抗肿瘤作用等。此外,还有大量研究表明黄酮类天然产物有效成分有降压、降血脂和抑制血小板聚集等多种药理作用。为此,受到各国政府和医药、食品等行业的高度重视和关注。目前为止,对杜梨叶中黄酮类物质提取、纯化工艺研究尚未见报道。杜梨药用称棠梨,主治功用为敛肺涩肠、止咳止痢,常用于治疗久咳、久泻和久痢等。为开发利用该资源,本研究对其黄酮类物质检测、提取与分离纯化工艺进行了初步探索,建立了一套经济、安全、适用的杜梨叶黄酮提取、分离与检测方法。其主要研究如下: 1.本试验采用紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对杜梨叶黄酮作了定性分析。建立了紫外可见分光光度法对杜梨叶总黄酮的测定方法。通过对检测波长的选择、标准品的选择、预处理方法、浓度与吸光度相关性的研究,确定了最佳检测波长为入=420nm,以芦丁为标准品,在0.06-0.54mg/mL范围内,其浓度与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为A=1.31667C-0.01678,相关系数达r=0.99440,稳定性、精密度和重现性均理想,其RSD分别为3.55%(n=5)、1.36%(n=5)、4.79%(n=5)。平均回收率分别为94.41%,RSD为2.33%(n=5)。 2.在提取工艺研究中,采用乙醇水溶液为浸提剂,以杜梨叶总黄酮含量为考察指标,通过单因素实验、正交实验以及方差分析,对提取条件进行了优化,确定了最佳提取工艺为ABCD.即乙醇浓度为70%、浸提温度为70℃、浸提时间为1h,固液比为1:20,黄酮提取率为4.87%。 3.本试验采用大孔树脂对杜梨叶黄酮进行富集分离。根据大孔树脂的吸附机理,运用静态吸附与解吸实验对大孔树脂进行筛选。然后,通过单因素实验、正交实验以及方差分析确定了杜梨叶黄酮分离纯化的最佳操作条件。静态吸附与解吸中,AB-8大孔树脂表现出最好的吸附性能与良好的解吸效果,其饱和静态吸附量为12.15mg/g、解吸率为95.88%。实验表明,料液浓度和上柱速度明显影响吸附效果,而洗脱效果由乙醇浓度、洗脱速度以及洗脱剂用量来决定。实验确定的最佳吸附条件为:上柱速度为2.0 BV/h,料液浓度为0.370mg/mL,最佳洗脱条件为ABC,即乙醇浓度为75%,洗脱流速为2BV/h,洗脱体积为4.5BV,洗脱率为88.09%。 4.研究发现乙醇提取杜梨叶黄酮类化合物具有较强的抗氧化能力。应用清除DPPH·自由基揭示了水提取杜梨叶黄酮类化合物的抗氧化能力大于乙醇提取杜梨叶黄酮类化合物。水提取粗液的IC为0.06mg/mL,70%乙醇提取粗液的IC为0.08 mg/mL。结果表明,水提取粗液清除DPPH·自由基能力强于70%乙醇提取粗液。浓度在0.8mg/mL时,其均超过其半数清除率,水提取粗液达到84.57%,70%乙醇提取粗液为70.33%。