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牦牛肌红蛋白的基因克隆、分离纯化及其与能量代谢关系的初步研究

牦牛肌红蛋白的基因克隆、分离纯化及其与能量代谢关系的初步研究

作     者:苏永杰 

作者单位:西南民族大学 

学位级别:硕士

导师姓名:郑玉才

授予年度:2006年

学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 0905[农学-畜牧学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题:牦牛 肌红蛋白 纯化 乳酸脱氢酶 苹果酸脱氢酶 

摘      要:为探索牦牛适应青藏高原特殊缺氧环境的分子机制,对牦牛肌红蛋白开展了三个方面的研究:牦牛肌红蛋白基因的克隆;牦牛肌红蛋白的分离纯化;牦牛、水牛、黄牛心肌和骨骼肌肌红蛋白含量的测定及其与乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活力的关系。 1.从牦牛心肌中提取总RNA,参照普通牛的肌红蛋白基因设计引物,用RT-PCR克隆牦牛肌红蛋白编码序列,得到了长度为640 bp的序列,经过与普通牛的肌红蛋白比对发现,核苷酸同源性为99.5%,氨基酸序列同源性为100%,证明该序列为牦牛肌红蛋白基因的编码序列。 2.用盐析、CM-Sephadex阳离子交换层析、SephadexG-50凝胶层析等方法分离纯化牦牛肌红蛋白,SDS-PAGE分析其分子量约为17ku。 3.通过测定牦牛肌红蛋白含量,并与水牛、黄牛进行比较发现:牦牛心肌、骨骼肌肌红蛋白含量显著高于水牛和黄牛(P0.01);同一动物个体,心肌肌红蛋白含量显著高于骨骼肌(P0.01)。肌红蛋白含量与LDH、MDH活力比较分析显示:牦牛心肌、骨骼肌LDH、MDH活力显著低于水牛和黄牛(P0.01);同一动物个体,心肌LDH活力显著低于骨骼肌(P0.01),心肌MDH活力显著高于骨骼肌(P0.01)。各组织肌红蛋白含量与LDH活力呈负相关(r=-0.84),与MDH活力呈正相关(r=0.32),与MDH/LDH呈正相关(r=0.95)。

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