胞内分枝杆菌ELISA检测试剂盒的研制

作     者：宋力强 

作者单位：长春理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：葛淑敏

授予年度：2018年

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：胞内分枝杆菌 肝素结合血凝素 单克隆抗体技术 酶联免疫法 试剂盒 

摘      要：肝素结合血凝素(HBHA)是分枝杆菌分泌的一种黏附素,它是由致病性分枝杆菌产生的一种糖蛋白,肺外播散性结核重要毒力因素之一。HBHA在胞内分枝杆菌免疫诊断、治疗和预防方面的应用研究起重要意义。本文将构建好的pET-32a-HBHA质粒转入到BL21(DE3)中,在诱导剂IPTG作用下表达HBHA蛋白。经组氨酸镍柱纯化浓缩,SDS-PAGE电泳鉴定,获得约38 kDa大小,浓度为1.6 mg/ml的HBHA蛋白。应用单克隆抗体技术,以纯化的胞内分枝杆菌HBHA蛋白为免疫抗原制备抗胞内分枝杆菌HBHA单克隆抗体,得到三株细胞上清效价为1:1600的细胞株,体内扩大培养后,获得大量效价为2.56×10的抗体。并以HBHA单克隆抗体作为包被抗体建立胞内分枝杆菌ELISA检测方法。应用棋盘法优化检测条件,同时试验对封闭液进行了最佳选择,对检测样品的特异性、敏感性和准确度进行评估,评估结果显示,该法对其他抗原均无交叉反应,有良好的特异性,能检测菌体浓度为200个/ml,具有良好的敏感性,检测准确度高达93.3%,并成功组装试剂盒。该试剂盒对家畜胞内分枝杆菌病的诊断和防治具有重要的现实意义,具有广阔的发展前景和巨大的市场需求。