自噬在妊娠糖尿病中的作用

作     者：甘旭培 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：徐先明

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：自噬 妊娠期糖尿病 胎盘 微管相关蛋白1轻链3 

摘      要：目的:研究自噬对妊娠糖尿病(GDM)胎盘病理改变的影响。方法:1.收集2015年9月至2016年5月在上海市第一人民医院剖宫产术后的足月孕妇胎盘共75例。正常胎盘25例作为对照组,采用运动和饮食控制血糖的GDM胎盘26例为A1组,使用胰岛素治疗的GDM胎盘24例作为A2组。这些孕妇既往没有糖尿病病史,也无其他孕期并发症。2.标本采集收集入选孕妇年龄、体重、身高等相关数据。在手术日清晨采集孕妇静脉血,剖宫产术后立即收集胎盘组织,记录新生儿体重。3.检测指标采用葡萄糖氧化酶法测空腹血糖;采用高压液相色谱法检测糖化血红蛋白(HbAlc);采用血清糖化白蛋白液态试剂检测糖化白蛋白(GA)。采用苏木精-伊红(HE)染色法对组织染色后在显微镜下观察胎盘绒毛的结构的病理改变,同时采用免疫组化(IHC)染色法和Western blotting技术检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。4.培养并收集人绒毛膜滋养层细胞(HTR8)和脐静脉内皮细胞(HUVEC),通过Western blotting技术检测LC3在高糖环境下的表达情况;采用活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧水平(ROS),使用CCK8试剂盒检测细胞的增殖活力。结果:1.GDM患者的年龄、体重指数(BMI)较正常孕妇偏大,空腹血糖(FBG)、HbA1c、GA及新生儿体重均高于正常孕妇,具有统计学差异(P0.05)。同时A2组孕妇的年龄、BMI、FBG、HbA1c、GA等均高于A1组,其中空腹血糖差异具有统计学意义(P0.0001)。2.胎盘的病理改变主要存在于绒毛组织,病理特征以纤维蛋白沉积、合胞体细胞增多以及绒毛水肿为主。胰岛素治疗能减轻胎盘绒毛的病理损伤。我们发现LC3在所有胎盘组织中表达,包括正常的胎盘组织,具体表达的细胞包括合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞以及毛细血管内皮细胞。其中A1组胎盘组织的LC3表达水平最高,同时该组病理表现也最明显。A2组中LC3表达明显下降,胎盘病理改变也明显减少(P0.05)。3.LC3在高糖培养基培养的HTR8细胞和HUVEC细胞中表达增加,在使用胰岛素治疗后表达下降(P0.05)。通过检测自噬诱导因素ROS的水平我们发现高糖促进ROS水平升高,胰岛素治疗后ROS水平下降。同时也发现高糖会使细胞增殖活力下降,胰岛素治疗后细胞增殖活力增加。结论:高血糖诱导自噬,引起滋养细胞和血管内皮细胞过度自噬,导致胎盘组织出现病理性损伤以及结构改变。胰岛素治疗能够抑制自噬,减轻胎盘组织的病理损伤。