萝藦多糖的分离纯化及萝藦多糖对CCl4诱导的小鼠肝损伤的保护研究

作     者：曹阳阳 

作者单位：辽宁医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：郭斌

授予年度：2013年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：萝藦多糖 Ⅱ型ZTC1+1 天然澄清剂 纯化 保肝作用 

摘      要：目的 建立萝藦多糖（Japanese Metaplexis Polysaccharide）的分离与纯化方法并对其保肝作用进行初步研究。 方法 采用Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂对提取出的萝藦多糖复合物进行纯化优选得萝藦粗多糖，通过中空纤维超滤膜截留去除小分子杂质并且筛选葡聚糖凝胶柱规格，采用DEAE-52纤维素柱（二乙氨基乙基-纤维素DE-52柱）（2.6×50cm）纯化萝藦粗多糖，Sephadex G-100凝胶色谱柱进一步分离纯化萝藦多糖;用苯酚-硫酸法跟踪检测萝藦多糖含量;Sephadex G-100凝胶柱色谱，琼脂糖凝胶电泳法进行萝藦多糖纯度鉴定;建立CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型，对小鼠CCl4肝损伤模型进行实验，通过全自动生化分析仪测定血清ALT活性和AST活性。 结果 Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂纯化萝藦总糖的最佳工艺为A、B组分的加入量分别为药液体积的1%、2%，药液的浓缩程度为10mL/g，温度为70℃，加热时间为1h/1h;粗多糖经过DEAE-Cellulose-52和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱色谱进一步分级纯化得到两个主要多糖组分：JMP1-A，JMP3-B。两种多糖分别通过Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱色谱分析检测显示单一峰，琼脂糖凝胶电泳鉴定显示唯一斑点。萝藦多糖各剂量组均能对抗四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠的AST和ALT的升高，说明萝藦多糖能对抗CCl4引起的细胞膜脂质过氧化， 结论 应用Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂纯化萝藦多糖，不需要调整萝藦粗多糖溶液的pH，只需要根据待处理药液的性质选择A、B组分的加入量，纯化温度，药液浓度及纯化时间，就可以获得良好的澄清效果，使用起来方便，并且去除蛋白和多糖保留效果好。萝藦多糖能对抗CCl4引起的细胞膜脂质过氧化，保护肝细胞和亚细胞不受损伤。