6-姜酚肟对PC12细胞的抗凋亡保护作用和促分化作用

作     者：杜瑞 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：沈伟哉

授予年度：2008年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：6-姜酚肟 谷氨酸 PC12 凋亡 NGF 突触素 分化 

摘      要：目的:建立谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的模型,探讨6-姜酚肟对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的影响;建立NGF诱导PC12细胞分化的模型,探讨6-姜酚肟对NGF诱导PC12细胞分化的影响。 方法:体外培养PC12细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态。用谷氨酸造成细胞损伤,MTT法检测细胞活力,流式细胞术和Hoechst 33258 DNA染色法检测细胞凋亡,比较各种浓度的6-姜酚肟对PC12细胞凋亡的影响;用NGF诱导PC12细胞分化,倒置显微镜观察6-姜酚肟和NGF对PC12细胞分化和突起生长的影响并拍照;采用免疫荧光技术检测各组PC12细胞中突触素的反应的阳性强度。 结果:(1)经2.50～20.0 mmol/L谷氨酸处理24 h后,PC12细胞的活力比对照组明显降低,细胞存活率随谷氨酸浓度的升高而降低。谷氨酸对PC12细胞活力的半数影响浓度(IC)约为5.00 mmol/L。(2)在一定浓度范围内,6-姜酚肟能保护PC12细胞免受谷氨酸的影响,但是在较高浓度时6-姜酚肟对细胞有一定的毒性。经不同浓度的6-姜酚肟(3.13,6.25,12.50,25.00μg/mL)预处理后,PC12细胞活力明显提高,其保护作用随其浓度降低而提高。当浓度为6.25μg/mL时效果最好,细胞存活率达到75.20%(P0.01),当浓度为3.13μg/mL时对细胞的保护能力有所下降,细胞存活率为70.24%(P0.01)。(3)谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,5.00 mmol/L的谷氨酸处理24 h后细胞凋亡率为20.10%。经6-姜酚肟(3.13,6.25,12.50,25.00μg/mL)预处理后,细胞凋亡率明显降低,分别为3.50%(P0.01),2.80%(P0.01),9.60%(P0.01),17.7%(P0.05)。(4)NGF能诱导PC12细胞分化,10μg/L与50μg/L的NGF作用PC12细胞48 h后,分化细胞的百分比和阳性突起数目与对照组相比均明显增加(P0.01),50μg/L的NGF作用效果强于10μg/L的NGF。6-姜酚肟和10μg/LNGF共同孵育PC12细胞48h后,细胞的分化情况与50μg/L的6-姜酚肟单独作用相似。(5)6-姜酚肟单独作用于PC12细胞时,免疫荧光突触素染色阴性。6-姜酚肟和10μg/L NGF共同作用时的荧光强度与50μg/L NGF单独作用时的荧光强度相似,两者无明显差别(P0.05)。 结论:(1)谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,较低浓度的6-姜酚肟能有效对抗Glu诱导的PC12细胞凋亡而保护细胞,其中6.25μg/mL的6-姜酚肟效果最好。 (2)NGF能诱导PC12细胞向神经元样细胞分化。6-姜酚肟单独作用不能引起PC12细胞分化,但它能使低浓度NGF诱导PC12细胞分化的能力增强,使之达到高浓度NGF的效果。