生精散通过激活Nrf2通路调节氧化应激治疗弱精子症的研究

作     者：梁明 

作者单位：山东中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：闻姬

授予年度：2016年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：不育症 生精散 弱精子症 中性α-葡萄糖苷酶 ROS Nrf-2通道 精子活动率 前向运动精子 

摘      要：目的:观察生精散对弱精子症患者的治疗作用。根据中医症状评分表观察生精散治疗前后弱精子症患者中医症状评分的变化;应用计算机辅助精子分析系统观察生精散对弱精子症患者精子浓度及精子活动率的影响;免疫印迹试验(Western Blot)的方法观察弱精子症患者精子Nrf-2通路蛋白较正常人群是否下降,如有下调,进一步观察通过应用生精散药物治疗是否可以增强Nrf-2通路蛋白的表达,降低ROS对精子的损伤,并改善精子外环境,从而增强精子活力及超活化能力,最终起到治疗弱精子症的作用。从而初步探究生精散治疗弱精子症的治疗机制。方法:选择初诊精液分析正常的精液标本40份;严格按照纳入及排除标准,将纳入的弱精子症患者随机分为生精散治疗组患者40例,给予生精散(2.3g po tid)治疗1个月;安慰剂治疗组患者40例给予安慰剂(2.3g po tid)口服1个月;空白对照组弱精子症患者40例给予生活干预1个月。收集治疗前后各组患者的精液标本。根据中医症状评分表对所有入组患者干预前后均进行中医症状评分采集,通过比较干预前后患者评分的变化,观察生精散对弱精子症患者中医症状是否有明显改善。采用计算机辅助精子分析系统按《WHO人类精液检查与处理实验室手册(第五版)》行精子浓度及精子活动率的检测。精浆中的中性α-葡萄糖苷酶含量用改良Cooper法的ELISA试剂盒检测,精浆中的ROS含量用DCFDA法的ELISA试剂盒检测。免疫印迹试验(Western Blot)的方法观察正常精子及干预前后各组患者精子Nrf2通道蛋白表达情况。结果:生精散治疗组经治疗后,精子前向运动百分率明显高于治疗前,有统计学差异(PR:P0.0001);精子活动率明显高于治疗前,有统计学差异(PR+NP:P0.0001)。1个治疗疗程后,生精散治疗组患者精子前向运动百分率明显高于安慰剂治疗组及空白对照组,有统计学差异(PR:P=0.00090.001);生精散治疗组精子活动率高于安慰剂治疗组及空白对照组(PR+NP:P0.0001)。生精散治疗后比治疗前中医症状评分显著降低,有统计学意义(P=0.0140.05)。生精散治疗组经药物治疗后其中医症状评分较安慰剂治疗组和空白对照组治疗后均有明显改善,差异有统计学意义(P0.0001)。中性α-葡萄糖苷酶定量测定:生精散治疗组经治疗后精浆中性α-葡萄糖苷酶含量明显高于治疗前,差异有统计学意义(P=0.0060.01)。生精散治疗组精浆中性α-葡萄糖苷酶含量明显高于安慰剂治疗组及空白对照组,差异有统计学意义(P=0.0050.01)。ROS定量测定:生精散治疗组经治疗后ROS含量明显低于治疗前(P=0.0070.01)。生精散组精浆ROS含量明显低于安慰剂治疗组及空白对照组,差异有统计学意义(P=0.0070.01)。Nrf2蛋白表达指标用Nrf2相对表达量(Nrf2相对表达量=Nrf2的灰度值/相应内参灰度值)来表示。弱精子症组精子Nrf2蛋白相较正常人群组明显减少(P0.0001)。生精散治疗组患者治疗后精子Nrf2蛋白相对表达量较治疗前有显著增加,差异有统计学意义(P0.0001)。结论:1、生精散对弱精子症患者中医症状有明显改善。2、生精散对弱精子症患者的治疗作用可能是通过增加附睾中性α-葡萄糖苷酶含量,从而改善附睾精子外环境,增加精子运动力。3、Nrf2蛋白表达量的减少可能是弱精子症发生的原因之一。4、生精散对弱精子症患者有较好的临床疗效。其机制可能是:通过调控精子Nrf2通道蛋白的高表达,降低ROS的产生,减轻氧化应激对精子活力的损伤。