SDF-1-CXCR4与HIF-1在卵巢癌细胞转移中相互作用及机制研究

作     者：薛宝瑶 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：于月成

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：卵巢癌 SDF-1 HIF-1 侵袭 转移 

摘      要：研究背景卵巢癌系女性生殖系统恶性肿瘤之一,其死亡率位高不下,较高的侵袭性和转移性是导致患者以后不良的主要因素。大约75%左右患者一经诊断已为晚期,由于患者已发生远处转移,致使治疗棘手,患者已失去最佳治疗时机预后极差。因此,了解卵巢癌的转移机制对临床治疗及提高患者预后有着十分重要的作用。肿瘤的转移是一个复杂的多因素过程,趋化因子则在肿瘤转移过程中起着至关重要的作用。基质细胞衍生因子SDF-1(stromal derived factor-1,又称CXCR12)作为趋化因子家族中的一员,已成为近些年来研究的热点和重点。SDF-1主要与其相应的受体CXCR4结合从而诱导卵巢癌的转移进程,这一过程主要由于激活了下游的p38MAPK/PI-3K信号通路。p38MAPK/PI-3K信号通路被公认为是肿瘤转移过程中一条经典的信号通路,缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)发挥其作用被报道也依靠其上游此通路的激活作用。鉴于两者发挥作用依赖共同的信号通路,我们试想两者是否具有相关性,其相关机制是否为p38MAPK/PI-3K信号通路作用?因此我们的实验主要研究SDF-1-CXCR4与HIF-1在卵巢癌细胞转移中相互作用及机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。本实验主要研究SDF-1α与HIF-1α在卵巢癌中的相关作用及其机制,首次将两者在卵巢癌中联系起来,本研究证明了两者在卵巢癌组织中呈正相关,并对其具体通路进行了研究,阐明了两者间作用机制。研究目的***-1α与HIF-1α在卵巢癌组织中的表达是否相关。***-1-CXCR4生物轴是否会激活HIF-1的表达。***-1转录和表达的增加是否会促进CXCR4的表达。***-1对PI3K/AKT、MAPK信号通路和HIF-1激活作用是否一致5.探讨HIF-1是否会进一步促进CXCR4的表达以及VEGF的表达从而促进细胞的迁移。研究方法1.应用免疫组织化学法检测卵巢癌组织中SDF-α1与HIF-1α的表达;2.实时定量RT-PCR检测各个细胞组中HIF-1α的m RNA水平。3.运用Western-blot检测细胞中AKT/p-AKT、p-38/p-p38、HIF-1α、CXCR4的表达水平。4.采用ELISA检测VEGF的含量。***侵袭小室、划痕实验检测各组细胞的迁移。研究结果***-1α与HIF-1α在卵巢癌组织中的表达呈正相关(r=0.475,P0.01);2.q RT-PCR结果证明,随着加入外源性SDF-1量及时间增加,HIF-1α的m RNA水平依次增加(P0.05)。***-blot分析显示,control、control+SDF-1、control+CXCR4封闭抗体三组中,control+SDF-1组中p-AKT、p-p38量明显增高(P0.01);control、control+SDF-1、control+CXCR4封闭抗体、control+SDF-1α+LY294002四组中,control+SDF-1组中HIF-1水平明显增高(P0.01);control+SDF-1、卵巢癌细胞转染HIF sh RNA+SDF-1两组中,control+SDF-1组CXCR4量明显增高(P0.01)。***检测结果证明,control+SDF-1、卵巢癌细胞转染HIF sh RNA+SDF-1两组中,control+SDF-1组VEGF量明显增高(P0.05)。***侵袭实验结果:SDF-1组较空白组和对照组HIF sh RNA+SDF-1明显增强,有显著性差异(P0.01)。6.划痕实验结果:对于12h、24h、36h后划痕处的距离进行分析SDF-1组较空白组和对照组HIF sh RNA+SDF-1明显增强,有显著性差异(P0.05)。结论1.上皮性卵巢癌组织中SDF-1α和HIF-1α呈正相关。***-1-CRCX4生物轴促进HIF-1α表达。***-1促进PI3K/AKT、MAPK信号通路和HIF-1激活。***-1促进CXC4及VEGF的表达从而促进细胞的迁移。