辽宁绒山羊蛋白脂质蛋白质基因(PLP2)的表达研究
作者单位:辽宁师范大学
学位级别:硕士
导师姓名:金梅
授予年度:2015年
主 题:辽宁绒山羊 PLP2 生物信息学分析 荧光定量PCR Noggin基因干扰慢病毒
摘 要:辽宁绒山羊是我国特有的禁止基因外流的宝贵遗传资源,产绒量居全国第一。在前期工作中,我们通过建库及Primer walking质粒测通的方法克隆筛选出蛋白脂质蛋白质基因(proteolipid protein 2,PLP2)的全长序列。为了探究该基因的功能,我们对其进行了生物信息学分析(包括预测其开放阅读框,亲疏水性分析、跨膜预测分析、信号肽预测分析、磷酸化位点预测分析、二级结构预测、进化树的构建、多重序列的比对、保守结构域搜索),Real-time PCR,RT-PCR,原位杂交以及Noggin基因干扰慢病毒感染后目的基因的qPCR检测等的一系列分析研究。分析结果显示:首先,通过生物信息学分析,我们发现PLP2基因能够编码含有152个氨基酸的蛋白质,二级结构预测显示,PLP2基因含有α螺旋结构(46.05%)、延伸结构(12.5%)和无规卷曲结构(41.45%),功能位点分析显示,PLP2含有MARVEL结构域并且存在4个跨膜区,不存在信号肽,PLP2氨基酸含有3个Ser、2个Tyr和1个Thr可能成为蛋白激酶磷酸化位点;其次,通过RT-PCR检测显示,PLP2基因在皮肤、心脏、肝脏、肾脏、肺、脾脏中均有表达,且表达差异不是很明显,其中皮肤中的表达含量相对较高;同时,还运用了荧光定量PCR技术,定量的检测其在不同时期的表达情况,发现在兴盛期时,PLP2基因在次级毛囊的表达量约为初级毛囊的1.02倍(0.01