基于SCAR技术评价白斑猎蛛对假眼小绿叶蝉消化时间的研究及茶园蜘蛛的调查

作     者：高兴 

作者单位：湖北大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈建

授予年度：2014年

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

主      题：白斑猎蛛 假眼小绿叶蝉 特异性引物 阳性率 半衰期 

摘      要：蜘蛛是茶园生态系统中重要的捕食性天敌。正确评价茶园蜘蛛与害虫之间的关系,确定蜘蛛对害虫的捕食作用,对于农田蜘蛛的保护和利用具有十分重要的意义。蜘蛛是茶园中十分常见的害虫天敌,在动物分类学上隶属于节肢动物门蛛形纲蜘蛛目。据世界蜘蛛名录(December,31,2014)报道,全世界蜘蛛共有112科3924属44540种,其中斜纹猫蛛、草间钻头蛛、白斑猎蛛、三突花蛛等对茶树害虫的控制作用较大。据全国各茶区调查结果显示茶园蜘蛛是茶园捕食性天敌中种群数量最多的一个类群,其发生量约占捕食性天敌的65%以上。因此,采用分子标记技术研究蜘蛛的取食与消化对茶园生物防治有着非常重要的科学意义。 在本研究中,本文作者选取跳蛛科白斑猎蛛为捕食者,假眼小绿叶蝉为猎物研究蜘蛛的取食与消化作用,根据NCBI的GenBank搜索,得到假眼小绿叶蝉COI的一段773bp的片段,GenBank序列号为KC172507.1。使用gene tool软件设计出一对特异性引物：叶蝉F：5 -AGGTGCTGTATTTGCTAT-3 ,叶蝉R:5 -CTAAGAAATGTTGAGGGA-3 ,扩增产物大小为146bp的序列。特异性验证结果表明,在茶园常见18种昆虫和茶园常见害虫茶毛虫,茶尺蠖等昆虫中,该引物特异性地扩增假眼小绿叶蝉DNA序列。设计白斑猎蛛喂食假眼小绿叶蝉后消化时间Oh,2h,4h,6h,8h,10h,12h,16h,20h,24h,36h,48h,72h共13个时间梯度,每个梯度10个样本重复,分别检测目的片段在蜘蛛头胸部和腹部的阳性率并计算半衰期。结果显示Oh时,头胸部检测阳性率为100%,腹部为0%;2h后头胸部阳性率为0,腹部为100%,表明该目的片段已从头胸部转移至腹部;72h后,无样本检测为阳性。通过计算分析可知,该目的片段在蜘蛛体内的半衰期为42.92h。 田间调查中,选取湖北省咸宁市汪大珍茶场作为调查地点,采用陷阱法与拍网法两种不同的采集方法对该茶园中天敌资源蜘蛛与茶树主要害虫进行了为期20个月每隔10天进行一次的连续调查。陷阱法采集到蜘蛛20科,32种,8841头,其中优势种为亚洲狂蛛;拍网法采集到蜘蛛22科,52种,4194头,其中优势种为白斑猎蛛。采用统计学方法对陷阱法与拍网法所采集到的蜘蛛与假眼小绿叶蝉进行相关性分析,结果显示,陷阱法采集到的蜘蛛与假眼小绿叶蝉之间存在负相关性,拍网法采集到的蜘蛛与假眼小绿叶蝉之间存在显著正相关性,表明该茶园中蜘蛛对假眼小绿叶蝉有着潜在的控制作用。