STGC3高表达对CNE2细胞放疗敏感性的影响

作     者：苏雷 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：贺修胜

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：鼻咽癌 STGC3基因 自噬 放疗敏感性 

摘      要：目的:恢复STGC3基因在鼻咽癌CNE2细胞高表达,分析CNE2细胞对X射线敏感性,探讨可能增敏分子机制。方法:1.构建RTP-STGC3-his慢病毒表达载体,感染CNE2细胞,建立CNE2-RTP-STGC3-his细胞系。2.实验分为两组,(1)照射组:CNE2-RTP-STGC3-his细胞(转STGC3基因)、CNE2-RTP-his细胞(转空载体)及CNE2组,以6MV X线照射2分钟,总剂量为4Gy。(2)未照射组:CNE2-RTP-STGC3-his细胞(转STGC3基因)、CNE2-RTP-his细胞(转空载体)及CNE2组,3.采用CCK-8方法,检测受照射细胞的活力。4.使用Transwell实验,检测受照射细胞迁移侵袭能力。5.应用SDS-PAGE电泳及蛋白质质谱分析,检测受照射细胞蛋白表达差异。6.施用Western Blot方法,验证受照射细胞部分差异表达蛋白质分子,以及LC3、p62、p-S6和p-ULK1自噬相关蛋白质分子的表达水平。结果:1.成功建立CNE2-RTP-STGC3-his及CNE2-RTP-his细胞系,STGC3基因在CNE2-RTP-STGC3-his高表达(课题前期完成)。红色荧光蛋白(RFP)检测,荧光显微镜下细胞内可见RFP表达,转基因及转空载体组细胞表达RFP数目均80%,Western Blot检测结果,显示STGC3蛋白CNE2-RTP-STGC3-his稳定高表达(p0.05),用于后续实验。***-8实验结果显示,经X线照射,CNE2-RTP-STGC3-his细胞活力,低于CNE2-RTP-his细胞,差异具有统计学意义(p0.05)。***实验结果显示,经X线照射,CNE2-RTP-STGC3-his细胞迁移侵袭细胞数小于对照组,差异具有统计学意义(p0.05)。***-PAGE电泳、蛋白质鉴定、Mascot数据库分析,结果显示,照射组与未照射组比较,细胞呈现出14-3-3、TUBA1B及calnexin蛋白质分子的表达水平升高。*** Blot检测结果显示,照射CNE2-RTP-STGC3-his细胞,14-3-3和自噬相关蛋白LC3-II表达水平降低(p0.05),p62、p-S6及p-ULK1表达水平升高,差异具有统计学意义(p0.05)。结论:***3基因在CNE2细胞高表达,增强放疗敏感性,其机制可能与抑制自噬有关。