氧化损伤对口腔鳞癌细胞scc-25生长与抑制的调控机制研究

作     者：谭婧玉 

作者单位：锦州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈军建;屈直

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：过氧化氢 氧化应激 口腔鳞癌细胞 炎症 超螺旋敏感定量PCR(ss-qPCR) 

摘      要：目的外源性的氧化刺激作用下诱导口腔鳞癌细胞中mtDNA损伤、修复、拷贝数的动态变化过程;研究DNA损伤与细胞活性以及mtDNA损伤与核DNA损伤相关性的研究;探索口腔鳞癌的致病机理和防治方法。方法选用口腔鳞癌中发病率较高,恶性程度较强的口腔鳞状细胞癌SCC-25细胞株为实验模型,选用皮肤纤维原细胞株BJ作为对照实验模型,以四个浓度H2O2(120μM-960μM),六个时间点(15min,1h,2h,24h,48h,72h)诱导细胞出现氧化损伤反应,通过ss-q PCR方法测定mtDNA损伤、修复和拷贝数降解的动态过程;MTT方法测定细胞活性与生长抑制;γH2AX方法测定细胞核DNA双链断裂情况;建星凝胶电泳实验进行口腔癌细胞核DNA单链及双链断裂情况。结果通过ss-qPCR方法检测两种细胞中mtDNA损伤,修复的动态变化发现,SCC-25细胞,在低水平的氧化应激作用下,会出现氧化损伤与修复的反应,拷贝数不会发生改变;高水平的刺激下,则形成不可逆的损伤,随着时间一直持续,拷贝数也显著降低。对于正常细胞BJ而言,低水平的氧化刺激,并没有引起细胞的损伤修复机制,随着刺激水平的提高,才表现出损伤,及一定程度的修复功能。比较可见,癌细胞对氧化刺激更为敏感,反应更为强烈。同时,两种细胞的MTT实验检测,癌细胞的LC50浓度仅为对照细胞的0.5倍,这与癌细胞在受到较低浓度刺激时就表现出的氧化损伤相对应。当对癌细胞中核DNA进行断裂检测发现,氧化刺激下,同样会引发核DNA的断裂,而且两种断裂趋势相同,说明mtDNA可以作为核DNA断裂的一种敏感指示剂。结论我们通过新的技术手段,首次检测出口腔癌在外源性刺激下的mtDNA损伤修复的动态变化过程。这样的一个动态过程将为癌症的早期诊断以及早期预防提供新的思路。同时,由外源性自由基诱发的口腔癌细胞与正常细胞之间的差异性反应,这也将为癌症特异性的针对性治疗提供新思路。通过流式细胞术及碱性凝胶电泳实验实验首次证明,mtDNA氧化损伤与核DNA氧化损伤具有相同的反应趋势,提示mtDNA可以作为核DNA氧化损伤的敏感指示剂。