纳米金棒标记旋毛虫诊断抗原的筛选及应用于血清学诊断的研究

作     者：曹颖 

作者单位：大理大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨毅梅

授予年度：2017年

学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：纳米金棒 生物标记技术 旋毛虫 血清学诊断 肌幼虫粗抗原 肌幼虫排泄分泌抗原 

摘      要：目的:利用纳米金棒具有独特的光学特性、合成稳定分散均匀、表面活性很高,易与其他原子结合,能够敏感、高效的检测待测样品的特点,制备不同径长比纳米金棒溶液,确定制备表面等离子共振波长最大的纳米金棒生长液的浓度和量。筛选出纳米金棒表面标记旋毛虫诊断的最佳抗原及最适宜浓度,使功能化的纳米金棒标记技术的灵敏性明显提高,可应用于旋毛虫感染血清抗体的早期或低度感染检测,为旋毛虫病早期快速检测提供新技术奠定实验基础。方法:1.改变生长液中十六烷基三甲基溴化铵(CTAB,cetyl trimethy ammonium bromide)、抗坏血酸(AA,ascorbic acid)、硝酸银(AgNO3,silver nitrate)的浓度和剂量,制备不同表面等离子共振吸收峰的纳米金棒,紫外分光光度计扫描纳米金棒表面等离子共振波长。2.胃蛋白酶消化法制备旋毛虫肌幼虫粗抗原、RPMI-1640培养法制备排泄分泌抗原,粗抗原、排泄分泌抗原表面标记纳米金棒,紫外分光扫描表面等离子共振波长,对比表面等离子共振吸收峰红峰移位,筛选纳米金棒表面标记的最佳抗原和最适应浓度。3.纳米金棒表面标记旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原分别检测旋毛虫感染小鼠不同稀释度、不同时间、不同感染程度的血清抗体,与小鼠血清抗体ELISA检测试剂盒检测结果进行对比,评价纳米金棒标记技术效果。结果:1.成功的利用金晶种子生长方法制备了不同表面等离子共振吸收峰的纳米金棒,生长液中CTAB量为11.875 mL浓度为0.2 M、抗坏血酸量为160μL浓度为100 mM、硝酸银量为150μL浓度为10 mmol/L、金晶种子液为108μL,纳米金棒紫外分光光度计吸收光谱值最大,径长比最大,溶液均匀稳定。2.成功的在纳米金棒表面标记不同浓度旋毛虫肌幼虫粗抗原和排泄分泌抗原,紫外分光光度计光谱扫描结果显示表面等离子共振吸收峰红峰移位最大值分别为8 nm和87 nm。3.纳米金棒标记法检测旋毛虫感染小鼠阳性血清抗体最大稀释度为1:800,血清抗体阳性最早出现在感染后第5天,最低感染量为50条旋毛虫感染。小鼠血清抗体ELISA试剂盒检测旋毛虫感染小鼠阳性血清最大稀释为1:700,血清抗体阳性最早出现在感染后第8天,最低感染量为100条旋毛虫感染。结论:1.成功的利用金晶种子生长法制备了不同径长比且能够作为抗原标记功能的纳米金棒。2.纳米金棒表面标记优先筛选最佳抗原为旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原,其最适宜浓度为20μg/mL。3.纳米金棒标记技术能够用于旋毛虫血清学检测,较小鼠血清抗体ELISA检测试剂盒检测抗体稀释度高、时间早、感染程度低,能够为旋毛虫病感染早期及低感染度检测提供新技术。