基底前脑巢蛋白阳性及阴性胆碱能神经元自然衰老及抗损伤的研究

作     者：王缓缓 

作者单位：大理大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱建华

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：基底前脑 巢蛋白 神经元细胞培养 氧化损伤 

摘      要：研究背景基底前脑一般指位于大脑半球内侧面一些灰质结构,与其他脑区无明显界限。基底前脑是一个具有高度异质性的区域,含有多种不同化学属性的神经元,主要包括胆碱能神经元、谷氨酸能神经元以及r-氨基丁酸神经元等。最近研究发现成年大鼠和成人基底前脑存在着一群巢蛋白免疫阳性(nestin-ir)神经元,并证实这群神经元属于胆碱能神经元。进一步研究发现巢蛋白免疫阳性(nestin-ir)胆碱能神经元对学习记忆及对中枢神经系统的损伤与修复起重要作用。国内外初步研究提示相对于巢蛋白阴性胆碱能神经元,基底前脑的巢蛋白免疫阳性胆碱能神经元可能具有更强的抗损伤能力,表现出更好的神经可塑性。目的本课题采用基底前脑神经元原代培养方法,通过细胞免疫荧光染色研究巢蛋白免疫阳性及阴性胆碱能神经元抗衰老及抗氧化损伤能力的不同,进一步揭示两种神经元的神经可塑性的差异,为相关的神经系统疾病的治疗来提供新基础。方法实验采用出生24h以内的新生SD大鼠,每次用量8只左右,取其基底前脑处的神经元进行体外培养,培养周期11天,分别在培养的第1天,第3天,第5天,第7天,第9天和第11天,取培养的基底前脑神经元细胞爬片进行免疫荧光实验,研究巢蛋白免疫阳性及免疫阴性胆碱能神经元的自然衰老过程。抗损伤的研究采用出生24h以内的新生SD大鼠,每次用量8只左右,取其基底前脑部位的神经元进行体外培养,在培养的第3天时,放入150μmol/L H2O2构建细胞损伤模型,作用12h后,取出培养的基底前脑神经细胞爬片进行免疫荧光实验,观察两种神经元得抗损伤能力差异。结果体外培养第三天和第五天细胞生长达到高峰,这时神经元胞体较大,神经元突起粗大,部分神经元之间形成网状的突触连接。其中可见巢蛋白阳性神经元胞体较大,突起粗大且长;巢蛋白阴性神经元胞体小,突起较少。体外培养五天之后的神经元细胞数目逐渐减少,胞体饱和度降低。但巢蛋白阳性神经元数目下降速率缓慢,占细胞总数的比例逐渐增加,巢蛋白阴性神经元数目下降速率较快,所占细胞总数的比例逐渐下降。正常衰老组从培养第7天开始巢蛋白阳性及阴性胆碱能神经元数目差异明显,用T检验方法,P0.05,无统计学意义。而损伤组中神经元P0.05,有统计学意义。这充分说明H2O2氧化损伤干预后巢蛋白阳性胆碱能神经元存活的数目较巢蛋白阴性胆碱能神经元多,细胞形态更好,比巢蛋白阴性胆碱能神经元有更强的抗损伤能力。结论体外培养的基底前脑神经元自然衰老及氧化损伤研究结果表明,与巢蛋白阴性胆碱能神经元相比,基底前脑的巢蛋白阳性胆碱能神经元抗衰老和抗损伤能力更强,表现出较强的神经可塑性。