LPL、C/EBPα基因在不同尾型绵羊尾部脂肪组织中的表达分析

作     者：韦璇 

作者单位：西北农林科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈玉林

授予年度：2014年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：绵羊 C/EBPα LPL 尾部脂肪 前体脂肪细胞 

摘      要：本研究旨在探讨LPL、C/EBPα基因与绵羊尾部脂肪沉积的关系。为进一步探寻阻断尾部脂肪过度沉积的机制，实现既能节约饲养成本又能充分发挥本品种的优良生产性能这一目的提供理论基础。 根据NCBI上牛C/EBPα基因(GenBank登陆号: NM76784.2)全长设计引物，采用RT-PCR技术克隆C/EBPα基因CDs区序列，并用生物信息学方法分析序列和蛋白的特征;分别采用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测LPL和C/EBPα基因在9月龄陕北细毛羊(长瘦尾型)、同羊(长脂尾型、短脂尾型)、西藏羊(短瘦尾型)、滩羊(长脂尾型)和哈萨克羊(肥臀型)5个品种绵羊共计18个个体的尾部脂肪组织中mRNA与蛋白的表达水平;随机选择6个月龄(3、6、9、12、15、18月龄)的滩羊，每个月龄体重大小一致的健康雄性个体3只，共计18只，采集其尾部脂肪，探讨滩羊LPL、C/EBPα基因随月龄增长在尾部脂肪组织中的mRNA表达规律;比较滩羊(长脂尾)、陕北细毛羊(长瘦尾)两种不同尾型绵羊品种在同一月龄(9月龄)时，其LPL、C/EBPα基因在尾部脂肪、皮下脂肪以及背最长肌中mRNA表达规律;以20日龄绵羊尾部脂肪作为试验样本，用酶消化法分离前体脂肪细胞，研究前体脂肪细胞的增殖与分化规律，并对分化过程中(诱导第0、2、4、6、8、10d)LPL、C/EBPα基因的mRNA表达水平进行检测。主要研究结果如下： 1.成功克隆绵羊C/EBPα基因全长序列，生物信息学分析结果表明，其编码区长度为1062bp，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA，编码353个氨基酸，C/EBPα蛋白的分子量为37150.8Da，与牛C/EBPα基因的相似性达99%，其编码的蛋白含一个典型的亮氨酸拉链结构。 2. LPL、C/EBPα蛋白表达趋势与mRNA表达趋势大致相同，均在脂尾型(同羊和滩羊)和肥臀型(哈萨克羊)绵羊尾部脂肪组织中具有较高的表达水平，而在瘦尾型(陕北细毛羊和西藏羊)绵羊尾部脂肪中具有相对较低的表达水平，且在同一品种内，同羊长脂尾型尾部脂肪中C/EBPα和LPL mRNA与蛋白表达水平均显著高于短脂尾型(P0.05)。证明LPL和C/EBPα基因的表达水平与绵羊尾部脂肪的沉积有显著相关性，并且两基因可能都在一定程度上促进了脂肪的合成。 3.滩羊尾部脂肪组织中LPL、C/EBPα基因的mRNA表达水平随个体发育性增长存在阶段性变化规律，均在3、9、18月龄时达较高水平，且与其余月份相比差异显著(P0.05)，在3月龄至18月龄阶段，均呈现出“下降-上升-下降-上升的趋势。 4.滩羊与陕北细毛羊相比，尾部脂肪中LPL、C/EBPα基因的mRNA表达水平均远远高于皮下脂肪和背最长肌，而在陕北细毛羊的皮下脂肪组织中C/EBPα基因却有相对较高的表达水平，说明尾部脂肪的过度沉积对全身脂肪的分配影响较大，且尾型不同的绵羊品种可能具有不同的脂肪沉积模式。 5.成功分离了原代绵羊尾部前体脂肪细胞，并诱导其向成熟脂肪细胞的分化，对LPL和C/EBPα基因的mRNA表达水平进行时序测定，证明在前体脂肪细胞分化过程中，LPL基因确实先于C/EBPα基因表达。