中国被毛孢的培养及其有效成分测定和废液综合利用研究
作者单位：四川农业大学
学位级别：硕士
导师姓名：周祖基
授予年度：2010年
学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学]
摘 要：冬虫夏草(Cordyceps sinensis (Berk)Sacc)又称虫草,为我国传统名贵滋补中药材,与人参、鹿茸齐名,并列为三大补品。天然冬虫夏草对环境的特殊要求,加上近年国内外市场对虫草需求的急剧增加,造成过度采挖,使虫草资源遭到严重破坏,市场供不应求。现有大量研究表明冬虫夏草的无性型为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)。本文以冬虫夏草无性型中国被毛孢为材料,研究不同氮源对其生长的影响、发酵菌丝和天然虫草中虫草素含量的差异、真菌在仿虫培养基上的生长状况及菌丝体接种蝙蝠蛾幼虫的感染情况,并对发酵废液的综合利用形式进行了探讨。 氮源试验结果表明：在试验的几种氮源中,中国被毛孢对黄粉虫蛹的吸收利用效果最好,培养80d,菌落直径最大、生物量最高;对大豆蛋白胨的吸收利用率最低,但仍高于不添加氮源的对照组。可见,氮是中国被毛孢生长的必需元素;中国被毛孢对动物类氮源的吸收利用率高于植物类氮源。推测,中国被毛孢在对原生寄主蝙蝠蛾幼虫的长期寄生过程中产生了某种适应性,中国被毛孢可能对地下昆虫如蛴螬、地老虎的蛋白也有较好的吸收利用率。 虫草素等核苷类成分是冬虫夏草中最主要的生理活性物质之一,具有多方面的药理作用。目前已把虫草素作为冬虫夏草质量指标之一。通过对几种人工液体发酵菌丝体和天然冬虫夏草中虫草素含量的测定发现,发酵菌丝中的虫草素含量略低于天然虫草中的含量,但没有显著差异。在天然冬虫夏草资源不能满足人们自己增长的虫草需求的情况下,可以考虑用人工发酵中国被毛孢菌丝代替天然虫草药用。 用中国被毛孢液体发酵废液拌麦麸饲喂黄粉虫,通过对黄粉虫羽化率、羽化整齐度、产卵量及孵化率的调查统计发现,添加中国被毛孢发酵废液的处理中,黄粉虫的各项指标均优于只饲喂基础饲料麦麸的处理。添加废液的处理黄粉虫羽化率更高,羽化更整齐,产卵量增加,良卵率提高。推知,发酵废液中确有可利用的营养物质,废液的其他有效利用途径有待深入研究探讨。 以蝙蝠蛾幼虫、蛴螬和地老虎为氮源,虫草原产地土壤浸提液、普通土浸提液和无菌水为固体仿虫培养基水源,通过对氮源、水源、鲜虫添加量和空气相对湿度进行四因素三水平正交试验,优化中国被毛孢的人工培养条件,进行人工产子实体的可能性探索。结果显示,以蝙蝠蛾幼虫为氮源,鲜虫添加量为40g/L,以虫草原产地土浸提液为培养基水源,培养空气相对湿度为65%时,中国被毛孢菌落直径增加最快,生物量最高,但培养80d未产生子座。 根据自然条件下蝙蝠蛾幼虫感菌的可能途径,通过对土壤颗粒大小(筛孔径大小)、幼虫处理方式(自然、喷雾、浸泡)、饲料处理方式(天然饲料、表面灭菌、拌菌饲料)和土壤处理方式(原土、无菌土、拌菌土)进行四因素三水平正交试验,优化人工菌丝感染蝙蝠蛾幼虫的最佳方法,试图对半人工培养虫草有性型进行探讨。结果显示,当土壤颗粒为0.55mm,幼虫表面用菌丝悬液喷雾,并在土壤中加拌菌丝时,培养30d蝙蝠蛾幼虫的僵虫率最高。饲料中是否添加菌丝对僵虫率没有显著影响。土壤的颗粒大小成为影响僵虫率的最显著因素,大颗粒的土壤处理形成的僵虫数更多,可能是因为大颗粒的土壤给幼虫体表造成微伤,使菌丝更容易寄生幼虫;在幼虫体表喷给菌丝悬液和拌菌土增加了菌丝与幼虫接触的机会,也可提高僵虫率。培养30d所有僵虫均未产生子座。
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