丹酚酸B对心脏细胞缺氧损伤保护作用的研究

作     者：杜嵘 

作者单位：天津中医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：郭利平;张伯礼

授予年度：2003年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：丹酚酸B,心脏微血管内皮细胞, 心肌细胞,缺氧预适应,细胞间粘附分子 1,蛋白激酶C,ATP敏感性钾通道 

摘      要：目的 在明确复方丹参方能有效治疗缺血性心脏病的基础上，对该方剂中君药丹参中的有效成分——丹酚酸B可能的作用机理做进一步探讨，阐明丹酚酸B对心脏细胞（心脏微血管内皮细胞、心肌细胞）在缺氧/复氧损伤中的保护作用及机制。 方法 通过心脏微血管内皮细胞、心肌细胞体外培养技术，建立缺氧预适应（HPC）模型，根据该作用发生机制，以细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）的释放、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量及内皮细胞的细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达为指标，应用多种检测方法观察丹酚酸B在不同传导途径中的作用。 结果 1. 缺氧条件下，丹酚酸B可明显增强心脏微血管内皮细胞（CMEC）、心肌细胞（CM）的细胞活力，对细胞的作用时间以20min为佳。 2. 应用酶联免疫的方法，在CMEC缺氧3小时，复氧6小时后即可检测到损伤后ICAM-1表达的升高。 3. 缺氧预适应能降低CMEC缺氧/复氧损伤后ICAM-1的表达，应用丹酚酸B对CMEC进行预处理则可产生与缺氧预适应类似的保护效果。 4. PKC抑制剂却未能阻断缺氧预适应对CMEC缺氧/复氧损伤后在ICAM-1表达上的保护作用。 5. 缺氧条件下，丹酚酸B可模拟HPC，对CM产生保护作用，增强细胞活力，减少LDH的释放。 6. 蛋白激酶C抑制剂chelerthrine可以阻断HPC对CM的保护，使细胞活力下降，CM损伤加重、LDH的释放增加;应用丹酚酸B作用于细胞后，可明显提高CM存活率、降低LDH的释放，重新产生HPC样作用。提示丹酚酸B有拮抗蛋白激酶抑制剂作用。 7. ATP敏感性钾通道阻滞剂优降糖同样可以阻断HPC对CM的保护，使细胞活力下降，CM损伤加重、LDH的释放增加，SOD活性降低，MDA含量增多;应用丹酚酸B作用于细胞后，提高了CM存活率、降低LDH释放，SOD活 性呈上升趋势，MDA含量相应下降。提示丹酚酸B有拮抗ATP敏感性钾通道阻滞剂作用。 结论 1. 丹酚酸B对CMEC、CM的缺氧损伤具有保护作用，并且这种作用可以在短时间内迅速起效;2. 丹酚酸B能有效降低缺氧/复氧后CMEC的ICAM-1的表达;3. 丹酚酸B能使被PKC抑制剂和K+ATP阻滞剂所取消的HPC效应得到重现，对心肌细胞作用靶点可能在PKC的下游，即通过开放K+ATP来发挥HPC效应。提示PKC-K+ATP途径参与了丹酚酸B对心脏细胞的保护作用。