玉夏胶囊对自发性高血压大鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制研究

作     者：胡坤媚 

作者单位：皖南医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：韩军

授予年度：2017年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：玉夏胶囊 自发性高血压大鼠 肾纤维化 血管紧张素II TGF-β1/Smads信号通路 P38/MAPK ERK/MAPK 

摘      要：目的:观察玉夏胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏纤维化的改善作用并探讨其可能存在的机制。方法:取14周龄雄性SHR大鼠28只,体重(240±20)g,适应性喂养2 W后,随机分为:玉夏胶囊高、中、低剂量组(0.6 g·kg-1、0.3 g·kg-1、0.15 g·kg-1,n=7)及SHR模型组(0.5%羧甲基纤维素钠,0.5%CMC-Na,5 mL·kg-1·d-1,n=7);另设WKY正常对照组(0.5%羧甲基纤维素钠,0.5%CMC-Na,5 mL·kg-1·d-1,n=7)。按以上剂量灌胃给药,连续10周。给药前及给药后每2周采用尾袖法测定其收缩压(SBP)、舒张压(DBP);给药前及给药后3、5、8周收集大鼠尿液,测定其尿量及尿微量白蛋白(U-mALb)含量;末次给药后,称量大鼠体重,取肾脏,测量左右肾湿重,计算肾脏重量指数;腹主动脉取血,分离血清、血浆,全自动生化仪测血清β2-微球蛋白(β2-MG)、血清肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测血浆及肾组织血管紧张素II(AngII)含量;HE及Masson染色分别观察肾脏病理组织学变化及胶原纤维变化;免疫组化法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及NF-κB阳性细胞表达;实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达;Western blot法分别测定肾组织MMP-9、ERK1/2、NF-κB、p-ERK1/2、P38、p-P38、p-Smad2/3、Smad2/3、Smad4、Smad7、TGF-β1及TIMP-1蛋白表达水平。结果:(1)与WKY组相比,SHR模型组组大鼠SBP、DBP明显升高(P0.01);给药后,各剂量组大鼠SBP、DBP值均有降低(P0.05 or P0.01),其中以玉夏胶囊高剂量组大鼠SBP及DBP下降最为明显。(2)与WKY组相比,SHR组大鼠给药前后尿量无明显变化,与SHR组相比,玉夏胶囊各剂量组大鼠尿量在给药后3W、5W、8W尿量均有升高(P0.01);(3)SHR组大鼠肾脏重量指数较WKY组明显升高(P0.01),各给药组较SHR组有不同程度的降低(P0.05 or P0.01);(4)与WKY组比较,SHR组大鼠U-mALb、血清β2-MG、Scr及BUN含量明显升高(P0.01),给予不同剂量玉夏胶囊治疗后,各剂量组U-mALb、血清β2-MG、Scr及BUN含量均有不同程度下降(P0.05 or P0.01),其中,玉夏高剂量组大鼠下降最为显著。(5)SHR组大鼠肾组织及血浆AngII含量较WKY正常组明显升高(P0.01),而玉夏高、中、低剂量组较SHR组肾组织及血浆AngII含量显著降低(P0.01);(6)HE及Masson染色结果显示,SHR组大鼠肾小管出现萎缩、肾小球基底膜明显增厚,肾间质出现纤维化及蓝色胶原纤维显著增多,而各用药组病理变化明显改善。(7)SHR组大鼠肾组织TGF-β1及NF-κB阳性细胞表达较WKY组明显升高(P0.01),各给药组TGF-β1及NF-κB阳性细胞表达较SHR组均有降低(P0.05 or P0.01);(8)RT-PCR结果显示SHR组大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达较WKY组明显升高(P0.01),各给药组较SHR组明显降低(P0.05 or P0.01);(9)与WKY组比较,SHR组大鼠肾组织MMP-9、NF-κB、p-ERK1/2、P38、p-P38、p-Smad2/3、Smad4、Smad7、TGF-β1及TIMP-1蛋白表达明显升高,Smad7蛋白表达降低(P0.01),与SHR组比较,玉夏胶囊各剂量组能不同程度降低MMP-9、NF-κB、p-ERK1/2、P38、p-P38、p-Smad2/3、Smad4、Smad7、TGF-β1及TIMP-1蛋白表达,升高Smad7蛋白表达(P0.05 or P0.01)。结论:中药玉夏胶囊能有效改善SHR大鼠肾纤维化,在一定范围内具有剂量依赖性,其机制可能与其降低血压、利尿、下调AngII水平,抑制过度激活的TGF-β1/Smads信号通路及调控P38/MAPK、ERK/MAPK相关通路有关。