中药与骨髓源干细胞联合治疗缺血再灌脑损伤大鼠的实验研究

作     者：池欣欣 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郑洪新

授予年度：2013年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：中药 骨髓单个核细胞 骨髓间充质干细胞 干细胞移植 蛛网膜下腔 缺血性脑血管病 

摘      要：目的： 观察同种异体骨髓间充质干细胞(BMSC)或骨髓单个核细胞(BMNC)经蛛网膜下腔移植以及中药蝮龙抗栓丸联合使用在治疗缺血性中风中改善神经系统功能障碍方面的疗效;探讨骨髓源干细胞移植，以及中药联合使用治疗缺血性中风的生物学机制;分析脑脊液在反映脑内神经细胞营养因子水平方面的意义。从而，为临床应用中药与骨髓源干细胞移植联合治疗缺血性脑血管病的综合治疗方案提供可靠而有价值的理论依据和科学证据。 材料与方法： 分离培养BMNCs和BMSCs,140只Wistar大鼠随机分为7组：1正常组，2假手术组，3模型组，4BMNC组，5BMNC联合中药组，6BMSC组，7BMSC联合中药组。3、4、5、6、7组应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌2h模型（MCAO），24h后通过蛛网膜下腔注射法移植100微升0.01MPBS溶液(3组)、BMNCS悬液（4组、5组，2.0×107个）或BMSCs悬液(6组、7组，2.0×107个)，5组、7组当日进行中药灌胃。移植后4天、28天应用mNSS神经功能评价量表，评定各组大鼠神经功能;应用定量ELISA法检测各组受损脑组织及脑脊液中胶质源性神经营养因子GDNF的含量。 结果： 1.与治疗后第4天相比，模型组在治疗干预后第28天mNSS神经功能评分降低具有统计学意义（P0.05），BMNC移植始终未体现出对缺血再灌后神经功能损伤的修复能力。5组于移植后期（28d）mNSS神经功能评分降低具有统计学意义（P0.05），提示大鼠对缺血再灌注损伤后脑内微环境的调节能力有限。与模型组比较，BMNC和BMSC移植（4d、28d）GDNF含量升高均有统计学意义（P0.05），体现上调能力，但幅度不高。两者比较：早期未见差别，BMSC在移植后期上调能力更强。中药联合BMNC组和中药联合BMSC组可以成倍上调MCAO大鼠脑组织内GDNF水平,与单纯细胞移植比较，两中药联合组GDNF含量升高有统计学意义（P0.05），且后期上调能力更强;与中药联合BMSC组比较，中药联合BMNC组（4d）GDNF含量升高有统计学意义（P0.05），移植后期（284d）两者效果未见差异。 3.脑脊液内GDNF的含量较脑组织内含量略低，但CSF内GDNF含量各组间比较的统计学结果与脑组织统计结果趋同。结论： ***移植能够改善MCAO大鼠神经功能，中药联合应用对缺血性脑梗塞神经功能的修复具有协同作用。接受同种异体骨髓源干细胞移植的MCAO大鼠未发生不良反应，蛛网膜下腔注射为一种安全有效的干细胞移植方式。 2.骨髓源干细胞蛛网膜下腔移植对脑内GDNF的调节呈上调趋势，中药复方蝮龙抗栓丸联合BMSC/BMNC移植可进一步大幅升高脑组织内GDNF的水平，且起效时间早，提高幅度大，作用平稳而持久，体现中药联合应用在干细胞移植方面的优越性。 3.脑脊液测定的结果可以间接反应细胞移植后脑组织内代谢的情况，在临床上对了解移植后干细胞的生物学功能状态和脑内微环境情况具有检验和监测意义。