糖尿病大鼠脑缺血再灌注后皮质区microRNA-155及VEGF、KDR、CD31的表达及意义

作     者：卢俊江 

作者单位：遵义医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：韩江全

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：糖尿病 脑缺血再灌注损伤 血管再生 血管内皮生长因子 微小RNA-155 

摘      要：目的：探讨microRNA-155及VEGF、KDR、CD31在糖尿病大鼠脑缺血再灌注后皮质区的表达及意义。 方法：取72只雄性SD大鼠，随机分为3组：假手术组（Sham组）、脑缺血再灌注组（Normal glucose cerebral ischemia/reperfusion group，NG组）、糖尿病脑缺血再灌注组（Hyperglycemia cerebral ischemia/reperfusion group，HG组）。大鼠经腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）建立糖尿病模型，继而通过改良Zea-Longa栓线法建立局灶性脑缺血再灌注模型。于缺血2h后再灌注24h对各组大鼠进行神经功能缺损评分，TTC（Triphenylte-trazolium chloride，氯化三苯基四氮唑）染色测定梗死面积，HE染色观察病理改变，TUNEL（Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediateddUTP nick end labeling，末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术）法检测凋亡细胞数目，免疫组化染色检测CD31表达，实时荧光定量PCR（Real-timePCR，qPCR）检测microRNA-155、VEGF mRNA及KDR mRNA的表达，Western-Blot法检测VEGF、KDR蛋白表达。 结果： (1)神经功能缺损评分：HG组神经功能缺损评分为3.83±0.31，NG组为2.33±0.21，Sham组为0.00±0.00。与Sham组相比，HG组及NG组神经缺损评分明显增加，差异有统计学意义(P0.05);与NG组相比，HG组神经缺损评分明显增加，差异有统计学意义(P0.05)。 (2)梗死面积比值：HG组梗死面积为45.08±1.14，NG组为26.21±1.37，Sham组为0.00±0.00。与Sham组相比，HG组及NG组梗死面积比值明显增加，差异有统计学意义(P0.05);与NG组相比，HG组梗死面积比值明显增加，差异有统计学意义(P0.05)。 (3)神经细胞凋亡指数：HG组为24.50±1.34%，NG组为13.00±0.37%，Sham组为2.50±0.56%。与Sham组相比，HG组及NG组细胞凋亡指数明显增加，差异有统计学意义(P0.05);与NG组相比，HG组细胞凋亡指数明显增加，差异有统计学意义(P0.05)。 (4)CD31的表达：免疫组化染色计算CD31免疫阳染数目：HG组为20.83±3.43，NG组为33.67±1.23，Sham组为5.00±0.58。与Sham组相比，HG组及NG组CD31表达明显增加，差异有统计学意义(P0.05);而与NG组比较，HG组的CD31表达明显减少，差异有统计学意义(P0.05)。 (5) qPCR和Western bolt分别检测VEGF的相对表达量：qPCR检测基因的相对表达量分别为：HG组为4.74±0.54，NG组为6.71±0.91，Sham组为1.33±0.09。与Sham组比较，HG组及NG组VEGF mRNA表达明显上调(P0.05);其中，与NG组相比，HG组的VEGF mRNA的表达明显下调，差异有统计学意义(P0.05)。Western-Blot检测蛋白相对表达量为：HG组为0.99±0.13，NG组为1.55±0.23，Sham组为0.36±0.04。与Sham组相比，HG组及NG组的VEGF蛋白表达明显上调，差异有统计学意义(P0.05);与NG组相比，HG组VEGF蛋白表达明显减少，差异有统计学意义(P0.05)。 (6) qPCR和Westren blot分别检测KDR的相对表达量: qPCR检测基因的相对表达分别为：HG组为4.06±0.60，NG组为6.16±0.96，Sham组为1.33±0.09。与Sham组比较，HG组及NG组KDR mRNA表达明显上调(P0.05);其中，与NG组相比，HG组的KDR mRNA的明显下调，差异有统计学意义(P0.05)。Western-Blot检测蛋白相对表达量为：HG组为0.28±0.01，NG组为0.58±0.08，Sham组为0.13±0.03。与Sham组相比，HG组及NG组的KDR蛋白表达明显上调，差异有统计学意义(P0.05);与NG组相比，HG组KDR蛋白表达明显减少，差异有统计学意义(P0.05)。 (7) qPCR检测microRNA-155的相对表达量: HG组为9.38±0.69，NG组为5.67±0.52，Sham组为1.36±0.07。与Sham组比较，HG组及NG组microRNA-155表达明显上调，差异有统计学意义(P0.