转基因水稻TT51-1基体标准物质研制

作     者：刘轶男 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：武爱波

授予年度：2012年

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

主      题：转基因水稻TT51-1 基体标准物质 均匀性 稳定性 量值 不确定度 

摘      要：以我国已经批准安全生产证书的转基因水稻TT51-1为研究对象，建立转基因水稻基体标准物质制备和质量评价体系，对于保障我国转基因产品标识管理制度的顺利实施具有重要意义，为此，本文开展了针对性转基因水稻基体标准物质制备和质量评价体系研究。 本研究主要利用实时荧光定量PCR技术，建立了转基因水稻基体标准物质均匀性、稳定性、特征量值测定和不确定度评估的技术和方法体系;同时，针对制备的三种转基因水稻基体标准物质的均匀性、稳定性、特征量值和不确定度进行了测试和分析。 1）均匀性。采用统计学的分析方法，分别测试了三种基体标准物质的瓶内和瓶间均匀性，结果表明，瓶内和瓶间均具有良好的均匀性。 2）稳定性。在不同贮存温度（-20℃、4℃、室温、37℃、60℃）和不同保存时间（0、2、4、8周）的条件下，检测了三种基体标准物质的短期稳定性。结果表明，转基因水稻TT51-1基体标准物质可在-20℃、4℃、室温甚至37℃的运输条件下，两个月内保持稳定;60℃条件下一个月保持稳定。同时，在不同贮存温度（-20℃、4℃、室温、37℃、60℃）和不同保存时间（0、3、4、6、9、12月）的条件下，检测了三种基体标准物质的长期稳定性。结果表明该基体标准物质可于-20℃、4℃和20℃稳定储存至少一年。 3）量值及不确定度。组织邀请了国内8家转基因检测实验室对TT51-1基体标准物质进行了量值测定的协同实验验证。对收回的有效的7家实验室数据进行了统计分析，并且计算了不确定度，三种基体标准物质的最终特征量值表达分别为0.56%±0.10%，1.18%±0.24%，5.10%±0.58%，并分别作为其真实值。 通过本研究，建立了转基因水稻基体标准物质制备过程中的4个关键技术参数的评估体系，并评估了实验室制备的转基因抗虫水稻TT51-1基体标准物质，为获得国家标准物质证书提供重要数据。本研究对我国转基因产品基体标准物质的质量评估体系的建立，特别是转基因水稻检测标准品的开发及质量评估具有积极意义。