不同survivin siRNA对PC-3细胞增殖和凋亡的影响

作     者：周毅彬 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：单玉喜;阳东荣

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：survivin 小干扰RNA RNA干扰 前列腺癌 凋亡 

摘      要：目的:观察靶向survivin基因的不同siRNA在不同时间点对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞survivin mRNA表达的抑制作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。 方法:本研究以雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株为研究对象,采用针对survivin基因二个不同位点,分别设计单独及同时负载二个survivin shRNA片段质粒载体。以脂质体法转染PC-3细胞株后,在荧光显微镜下观察转染效率。实验分为survivin 1组、survivin 2组、survivin 1+2组、阴性对照组和空白对照组。转染后24 h、48 h和72 h,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中survivin mRNA的表达,MTT法检测siRNA对PC-3细胞增殖的影响,流式细胞术检测凋亡率。 结果:与对照组相比, survivin 1组、survivin 2组、survivin 1+2组转染后24 h即对survivin mRNA的表达均能产生抑制效应, 48 h抑制率最高, 72 h后下降。三个实验组以survivin 1抑制率最高,转染48 h后达到52%。实验组均能抑制PC-3细胞的增殖,其中以Survivin 1抑制细胞的增殖能力最强。在诱导PC-3细胞的凋亡的研究中,质粒转染细胞转染48 h后,细胞凋亡最明显,其中survivin 1组凋亡率较高,达(13.6%±1.8%)。 结论:负载survivin shRNA的质粒载体转染PC-3细胞后,能明显抑制PC-3细胞增殖,抑制PC-3细胞Survivin表达,并能诱导PC-3细胞凋亡。本实验表明质粒载体诱导凋亡的最佳时机为48 h及RNAi研究中,干扰位点的选择至关重要,针对survivin mRNA不同位点的siRNA,具有不同的干扰效应。