猪肺炎支原体对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈功能影响的研究

作     者：李君佩 

作者单位：湖南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡仕凤;谭颖

授予年度：2015年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：猪肺炎支原体 感染率 猪肺泡巨噬细胞 实时荧光定量PCR 

摘      要：猪气喘病,也叫猪喘气病、猪地方流行性肺炎,更通常被学者们称为猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS)。它是具有传染性的可接触性的动物疾病。引起MPS的是一种猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumniae, Mhp)病原,因被其感染而致病。就目前国内外研究现状来看,本病死亡率不高,但倘若侵入其它病原引起继发性感染将可能造成患病大量猪死亡,从而造成不容小觑的经济危害,对养殖户、养猪业来说损失巨大。作者为全面准确了解湖南省部分地区屠宰猪猪喘气病的感染情况,以及探究Mhp对猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophages, PAM)外源性抗原加工递呈功能有怎样的影响?本试验进行的主要工作及产生的结果如下：作者用普通PCR方法对湖南省的株洲醴陵、益阳赫山、浏阳葛家乡、岳阳湘阴、邵阳新宁、衡阳耒阳6个地区的部分规模猪场的猪肺炎支原体感染率进行调查,采集猪肺样本共322份,使用粗提煮沸法获得样本DNA,分别统计湖南省部分地区屠宰场猪喘气病的感染率。发现猪肺炎支原体在该地普遍存在,平均感染率为20.8%(67/322),感染率详情分别为：株洲醴陵19.2%(11/57),益阳赫山18.1%(8/44),浏阳葛家乡20.0%(13/65),岳阳湘阴17.5%(7/40),邵阳新宁23.2%(13/56),衡阳耒阳25.0%(15/60)。阳性产物经生物公司测序比对,与NCBI上已发表的序列同源性高达95%-99%。通过对以上六个地区屠宰猪猪肺炎支原体的感染率调查,真实了解了该地Mhp的感染情况,为今后的流行病学调查提供初步参考理论,也有针对性的对发病地区进行干预及防疫,从而降低感染率。另拟用体外感染的方法,将猪肺泡巨噬细胞分离培养,与一定体积比的猪支肺炎支原体共同孵化,用荧光定量PCR获得相关因子和相关模式受体在不同时间节点(12、24、36、48h)的变化规律。用实时荧光定量PCR方法测定Toll样受体TLR2、TLR6、共刺激分子CD86,以及相关基因：MHCⅡ、SLA-DM、Li链mRNA在不同时间节点其表达量的变化,分析Mhp感染对PAM外源性抗原递呈功能的影响。结果显示：与对照组相比,MHCⅡ分子mRNA转录量在感染后12h到高峰(83倍),在48h已经检测不出;SLA-DM分子mRNA转录量在感染后12小达最高(178倍),至36小已经检测不出;Li分子mRNA转录量在感染后12升高17倍,至48h已经检测不出;CD86分子mRNA转录量在感染后12小上升至对照组的181倍,48小时已经检测不出;TLR2分子mRNA转录量在感染后12h即受到抑制,表达量是对照组的0.7倍;TLR6感染后12h快速升高至对照组的380倍,36h后已经检测不出。初步证实：Mhp能够起到对屠宰猪PAM产生免疫抑制的作用。本试验证实了湖南省部分地区MPS存在的事实,为MPS的防控提供依据,也将为猪场检疫检验提供必要的理论参考。此外本试验还论证出：Mhp对PAM的外源性抗原加工递呈功能存在较强的抑制作用。为科研者们进一步弄清MPS的致病机理打下基础,也加强了猪场管理者、散养户经营者、农民养殖户等对MPS疾病方面的了解,在一定程度上,对他们来说是一个有益且客观的参考。