五种植物内生真菌的分离及其次级代谢产物生物活性研究

作     者：Muammer Abdewahed Elsunni（桑尼） 

作者单位：兰州理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨中铎

授予年度：2017年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：内生真菌 次生代谢产物 单胺氧化酶抑制活性 

摘      要：内生真菌是指其部分或全部生命周期生活于健康植物组织细胞内或细胞外的真菌。单胺氧化酶是抗抑郁药(抑制MAO-A亚型)和抗帕金森(抑制MAO-B亚型)的药物靶点。乙酰胆碱酶是催化乙酰胆碱分解和一些其他胆碱酯类作为神经递质的酶,这种酶抑制剂用于治疗阿尔茨海默病。本论文从5种药用植物中分离纯化了35株内生真菌。其中从马蔺(Iris alctea)中分离得到11株,圆锥山蚂蟥(Desmodium elegans)中得到7株,丹参(Salvia miltiorrhiza)中得到6株,马先蒿(Pedicularis resupinata)中得到6株,两似蟹甲草(Parasenecio ambiguus)中得到5株。对35株菌进行发酵,发酵液用乙酸乙酯萃取,菌丝体用甲醇提取,共得到70种粗提物。用酶标法对粗提物进行抗单胺氧化酶活性测定。结果显示,从圆锥山蚂蟥(Desmodium elegans)中得到的SMH-3菌株具有显著的抑制单胺氧化酶的活性,IC50值为16.2μg/mL。而其它菌株抗单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶的活性较低或者没有抗单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶的活性。通过现代色谱技术(制备型高效液相色谱、薄层色谱和硅胶柱色谱)对SMH-3菌株的化学成分进行分离纯化,并通过单体化合物的理化性质以及1H-NMR、13C-NMR和MS等现代波谱学手段对其结构进行了鉴定。鉴定了8个单体化合物,分别是:flufuran(1),deactylfructigenines A(2),(N-(4-hydroxymethoxy phenyl)acetamide(3),fructigenines B(4),Ergosterol(5),Ergosterol peroxide(6),Epi-aszonalenin A(7),Dibutyl phathalate(8)。通过酶标法检测化合物1(flufuran)的抗单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶活性。结果显示,化合物1(flufuran)具有显著的抗单胺氧化酶活性,当阳性药异丙肼的IC50值为5.7μM时化合物1的IC50值16.2μM。通过对核糖体RNA基因区ITS1-5.8S-ITS2的PDA形态和DNA序列的分析,并结合菌落形态颜色及菌丝体、分生孢子的观察,最终SMH-3鉴定为波兰青霉(Penicillium polonicum)真菌。