中国株乙型肝炎病毒D基因型全序列分析;HBV基因型分型方法学建立及初步应用

作     者：阎丽 

作者单位：第一军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：侯金林

授予年度：2001年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：乙型肝炎病毒 基因型 聚合酶链式反应-限制片段长度多态性 种系发生树 无症状携带者 肝硬化 

摘      要：为了解乙型肝炎病毒(HBV)D基因型在中国的存在状况及全基因序列特征， 应用在聚合酶链式反应(PCR)扩增HBV前S基因基础之上的限制性片段长度 多态性(RFLP)的方法调查了中国部分地区HBV基因型分布。认为D基因型毒株 在中国部分地区并非少见。全基因PCR和克隆后测定并分析了一例HBV D基因型 毒株的全基因，GeneBank Accession Number为AF280817。GeneBank中全部30株 野生型HBV D基因型毒株的种系进化树提示：本文报告的唯一一株中国D型 AF280817株与瑞典的四株D型进化距离最近;亚洲呈非HBV D基因型分布的优 势地域;认为病毒传入来源、迁移的不同及病毒在具有不同遗传和免疫特质的宿主 中的长期选择可能是形成HBV同一基因型病毒株进化距离不同的原因。 本文应用DNASIS和CLUSTALW分析软件将已发表的223株HBV全序列进 行基因型分型、S基因核苷酸及氨基酸序列对齐比较，分析每一种基因型特有的核 苷酸或氨基酸序列后发现了每一种基因型特异性的限制性内切酶，建立了S基因 PCR-RFLP的基因型分型方法学，可鉴别A-F基因型。部分不同基因型标本经S基 因序列测定证实了此方法的准确性。该方法克服了既往方法学参考序列少，代表性 略差，图谱复杂等缺点，更具简明、灵敏和特异性，益于HBV基因型的流行病学 调查及基因型在HBV感染疾病进程中潜影响的研究。用此方法初步探讨HBV基 因型与HBV疾病谱相关性，对广东地区HBV感染者200例，其中无症状携带者 (AsC)组80例和肝硬化(LC)组120例血清标本分型。结果表明广东地区未发 现A、E和F基因型，以B和C型为优势基因型，AsC组中以B型为主要基因型 (37/80)，同一疾病谱中基因型分布均与e抗原状态无显著性差异(P0.05);不同 疾病谱的两组基因型分布有显著性差异(P0.01);C型在ASC→LC中呈现增多趋 势，而B和D型在ASC→LC中呈现减少趋势，ASC与LC组相比X=31.924 P=0.000， 可预示：可能感染HBV D基因型病情轻，感染HBV C基因型病情易加重。