化学萃取同种异体神经修复鼠坐骨神经缺损的实验研究

作     者：张思胜 

作者单位：武汉大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘世清;彭昊

授予年度：2004年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：化学萃取 神经移植 坐骨神经 

摘      要：目的：通过化学萃取同种异体神经，去除髓鞘和雪旺细胞，形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损，研究神经再生效果。 方法：健康SD大鼠30只，Wistar大鼠20只，雌雄不分，体重200～220g。将Wistar大鼠左侧坐骨神经切取25mm后，随机选择10条坐骨神经，用溶血磷酯酰胆碱、叠氮钠等试剂组成的非变性生物剂处理，得到无细胞的基膜管。另10条坐骨神经不作任何处理。动物经20％乌拉坦腹腔注射麻醉后，左侧大腿后外侧切口，在距坐骨神经出口1cm以远处用双面刀片切断坐骨神经，造成20mm的神经缺损。将动物随机分为三组，每组10只，A组实验组：将制备好的无细胞基膜管支架放置于神经断端，用10-0显微缝合线在显微镜下缝合两断端;B组对照组Ⅰ：自体神经移植组，将切取的自体神经按A组方法原位缝合于神经两断端;C组对照组Ⅱ：异体神经移植组，将未经处理的异体坐骨神经缝合于神经两断端，方法同前。术后8周、12周用肌电图仪检测手术侧再生神经运动诱发电位潜伏期及波幅变化;12周时分别取材，作HE染色、亚甲基蓝-碱性品红染色，光镜下观察有髓神经纤维结构;用电脑图像分析处理系统对亚甲基蓝-碱性品红染色标本进行图像分析，记数有髓神经纤维数目、轴突直径及髓鞘厚度;一部分作电镜取材，在日立透射电镜下观察再生神经超微结构。 结果：1．动物一般观察 异体神经移植组在术后1周，所有动物均出现足部红肿、溃疡、脱趾，12周后仍未愈合。无细胞基膜管移植组(A组)及自体神经移植组(B组)术后2周各有3只及2只开始出现溃疡，其余动物仅出现红肿，12周时均已愈合。术后12周用针和盛70℃水的试管刺激患肢足趾部，A、B两组均出现肢体屈曲、回缩反应，C组则未出现此反应。术后8周及12周取材时，发现异体神经移植组局部粘连严重，并伴有渗液，未见神经纤维连接缺损。A、B组粘连较轻，外观与正常神经相似。2．肌电图测量及分析 术后2月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅，A组分别为3.37±0.54ms、13.82±1.73mv，B组分别为2.82±0.49ms、17.45±1.51mv，A组低于B组(p0.05)，3个月时A组潜伏期及波幅分别为2.74±0.49ms、19.02±2.32mv，B组分别为2.32±0.46ms、21.04±1.09mv，A、B两组无显著性差异(P0.05)。C组仅见瘢痕组织，无神经纤维再生连接缺损处，无法进行检测。3．亚甲基蓝-碱性品红染色及电镜观察 两组均见再生神经纤 维呈束状分布，有多个神经束，每一个神经束内见大量密集、粗大的有髓神经纤 维，神经束之间充满增生的胶原，未见瘫痕形成，再生血管散在分布。电镜下，A 组可见有髓神经纤维及无髓神经纤维再生明显，排列规则，轴突粗大，再生轴芽 被雪旺细胞包裹，髓鞘较厚，与B组结果相似。4.轴突图像分析用电脑图像分 析处理系统对亚甲基蓝一碱性品红染色标本进行图像分析，术后3个月A组有髓神 经纤维数目、直径及髓鞘厚度分别为2904士410.82个、3.63士0.43林m、0.83士 0.13林m;B组分别为3113.00士390.04个、3.97士0.32娜、1.32士0.24娜。A组的 髓鞘厚度在术后3个月时低于B组，有显著性差异(P0.05)。A、B两组轴突直 径及数目无显著性差异。 结论:这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移，是一 种良好的神经移植替代材料。