白藜芦醇系列衍生物对肿瘤细胞增殖的影响

作     者：吕博 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈艳华

授予年度：2015年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：乳腺癌 结肠癌 胃癌 白藜芦醇衍生物 白藜芦醇 

摘      要：目的:探讨一系列引入氟原子的白藜芦醇衍生物对体外培养的人肿瘤细胞的生长抑制的影响,为进一步研究其抗肿瘤机制提供基础。方法:通过MTT法研究并检测了该系列衍生物对体外培养人结肠癌SW-480细胞、胃癌SGC-7901细胞和乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制增殖作用,评价其对人结肠癌、胃癌、乳腺癌细胞作用的选择性。同时采用台盼蓝计数法观察活细胞及死细胞数,计算细胞存活率,绘制细胞生长曲线,评价该系列最佳衍生物对人肿瘤细胞的生长抑制作用;AO/EB染色法荧光显微镜观察该系列最佳衍生物诱导人肿瘤细胞凋亡的形态学改变;应用PI染色流式细胞术分析检测该衍生物诱导人肿瘤细胞凋亡的程度。结果:本实验通过MTT比色法分析显示,以结肠癌SW-480细胞、乳腺癌细胞MDA-MB-231和胃癌SGC-7901细胞为研究对象,考察了14种白藜芦醇衍生物的抗肿瘤作用,其结果表明,在分别作用于结肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞24小时后,14中衍生物对乳腺癌MDA-MB-231细胞均表现出生长抑制作用,其中y3-6组的抑制作用明显强于其他白藜芦醇衍生物组;14种衍生物中大部分对胃癌表现为生长抑制作用,但y2-36、y3-1、y3-28、y2-77对胃癌SGC-7901细胞表现生长促进作用;14种衍生物中y3-20对结肠癌SW-480细胞表现生长抑制作用,此外该系列其他药物均对结肠癌表现为生长促进作用。说明该系列14种药物对人乳腺癌具有较强的抑制效果,对人胃癌及人结肠癌效果不佳,且对不同的肿瘤细胞具有选择性。在14种白藜芦醇衍生物中y3-6的活性明显强于白藜芦醇(Res),对于人乳腺癌细胞y3-6及白藜芦醇的IC50值分别为34.39μM及153.74μM。用120μM的y3-6处理人乳腺癌细胞24小时,其相对抑制率达到78.5%,同浓度下的白藜芦醇及5-氟尿嘧啶的相对抑制率为49.36%和79.42%,证明y3-6对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长抑制作用明显强于白藜芦醇,与5-氟尿嘧啶作用近似。同浓度下其对结肠癌SW-480细胞为促进生长作用,对胃癌SGC-7901细胞的相对抑制率为26.48%,提示y3-6对不同的肿瘤细胞,作用不同。台盼蓝细胞计数法表示:将浓度20μM的y3-6、白藜芦醇、5-氟尿嘧啶分别培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞4天,并绘制生长曲线。可以观察到y3-6对乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制作用强于白藜芦醇,且呈时间依赖性,与5-氟尿嘧啶相当。AO/EB染色法表示:以10μM、20μM、40μM浓度的y3-6、白藜芦醇、5-氟尿嘧啶分别培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞24小时,置于荧光显微镜下观察,可见不同程度的早期凋亡及晚期凋亡细胞,凋亡率呈浓度依赖性。y3-6的凋亡率分别为7.06%、8.93%、21.68%,高于白藜芦醇组。PI染色流式细胞术分析表明:y3-6对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡作用呈浓度依赖性,以10μM、20μM、40μM浓度的y3-6培养乳腺癌MDA-MB-231细胞24小时,其凋亡率分别为14.81±0.86%、15.93±0.09%、33.67±1.15%,同浓度下白藜芦醇的凋亡率为7.65±0.33%、9.77±0.21%、18.99±0.07%,y3-6的诱导凋亡率均高于同浓度的白藜芦醇组。结论:1 14种白藜芦醇衍生物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活性均有抑制作用,其中y3-6抑制作用最强,其机制可能与y3-6诱导肿瘤细胞凋亡有关。2 14种白藜芦醇衍生物中,其中10种药物对人胃癌SGC-7901细胞有抑制作用,另4种对人胃癌SGC-7901细胞为促进生长作用。3 14种白藜芦醇衍生物中仅y3-20对结肠癌SW-480细胞增殖表现为抑制作用,其他13种衍生物表现为生长促进作用。