“加减益经汤”对去势大鼠学习记忆障碍的预防治疗及其作用机制研究

作     者：牟南樵 

作者单位：湖北民族学院 

学位级别：硕士

导师姓名：罗洪斌;李素萍

授予年度：2018年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：学习记忆能力 加减益经汤 去势雌性大鼠 

摘      要：目的本次研究的主要目的是用行为学、组织切片以及生物化学的研究方法探讨“加减益经汤对雌性去势大鼠学习记忆障碍的预防治疗及其机制研究,从而在临床上为该方应用于预防治疗绝经后导致的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)奠定一定的理论基础。方法选取适龄的雌性SD大鼠60只,体重(220±30)g,分为6个实验组,每组10只。其中模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组的雌性SD大鼠进行去势处理,空白组进行切开后缝合处理。造模成功一周后,中药低、中、高剂量组进行相应剂量组浓度的“加减益经汤药液灌胃,阳性对照组采用戊酸雌二醇灌胃,模型组和空白组采用温双蒸水灌胃。灌胃每日两次,用药时间为8周,最后一周同时进行水迷宫训练与测试,测试结束后取出大鼠脑组织,进行灌流、高尔基染色的脑组织4%多聚甲醛保存,取出的新鲜海马组织零下80℃保存,之后应用免疫印迹检测各个实验组大鼠海马各区Tau蛋白磷酸化位点和糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase 3β,GSK-3β)及磷酸化的GSK-3β的表达水平,同时检测雌激素受体-α(Estrogen receptor-α,ERα)的表达水平。应用高尔基染色观测大鼠海马神经发育的情况,应用尼氏染色检测大鼠海马新生神经元的数量。结果1.水迷宫测试结果提示“加减益经汤能够缩短去势大鼠找到平台的时间,并能提升在目标象限的运动路程和时间。2.免疫印迹结果提示本方能够降低大鼠海马Tau蛋白磷酸化位点的磷酸化水平,以及降低GSK-3β活性表达。3.本方在去势动物模型中体现了类雌激素的作用,增加了ERα的表达。4.高尔基染色结果提示本方能够提高神经树突分支数量和轴突棘数量。5.尼氏染色结果提示本方能够增加海马各区新生神经元的密度和数量。结论“加减益经汤可以有效预防去势雌性大鼠在学习和认知障碍上的改变,保护大脑的学习记忆能力,其作用机制可能是通过减少GSK-3β活性表达从而降低Tau蛋白相关位点的磷酸化水平,发挥了类雌激素作用,最终保护了海马区神经细胞的形态和功能,预防了阿尔兹海默病的进一步发展。