茶皂甙的生物转化及生物活性研究

作     者：常慧 

作者单位：大连工业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：田晶

授予年度：2009年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 081703[工学-生物化工] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 10[医学] 

主      题：茶皂甙 生物转化 氧化性 LC-Q-TOF-MS/MS 

摘      要：皂甙的生物活性与其糖链结构有着密切的关系,本论文以酶解茶皂甙得到低糖链高活性的皂甙为目的,对Aspergillus niger48s发酵产生的β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶解茶皂甙的最佳条件。利用lmm厚的层析板制备酶解后不同迁移率的新皂甙,采用薄层层析(TLC)进行分析,通过超高压液相色谱-质谱联用技术对酶解后的皂甙进行结构鉴定,并研究酶解前后茶皂甙对油脂过氧化值的影响。 将Aspergillus niger48s发酵产生的β-葡萄糖苷酶通过DEAE Cellulose52离子交换层析多次纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,达到电泳纯,其分子量为60.0kDa。将其与茶皂甙进行酶反应试验,结果表明：酶反应最适底物浓度5mg/ml,最适pH6.0,最适温度50℃,最适反应时间16小时。 采用1mm厚的薄层层析板制备酶解后的茶皂甙,产物经过溶解,过滤后进行TLC分析,得到Rf分别为0.87,0.23的新皂甙,最适展开剂为：氯仿：甲醇：水=7：3：0.5。 为了研究酶解前后茶皂甙生物活性变化,根据国家标准进行抗氧化性实验,测定茶皂甙对油脂过氧化值的影响,结果表明：茶皂甙可以加速油脂的氧化,而酶解以后茶皂甙对油脂过氧化值的影响进一步增强,且Rf为0.23的新皂甙对油脂过氧化值的影响强于Rf为0.87的新皂甙。 为进一步确定酶解后得到新皂甙的结构,采用LC-MS/MS对酶解后的两组新皂甙进行分析,结果发现Rf=0.87与Rf=0.23的新产物分子量相同,且保留时间相同,由于在薄层层析板上迁移率不同,初步确定这两个新产物为同分异构体,其分子量为724,将其进行MS/MS分析,推测分子式为C38H60013,可能是3-氧-[β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-28-乙酸基-茶皂甙元A,为茶皂甙A2脱掉一分子阿拉伯糖、一分子木糖、一分子半乳糖,同时-OAng酯键水解脱掉一分子当归酸的产物,或者是茶皂甙A5脱掉一分子阿拉伯糖、一分子葡萄糖,一分子半乳糖,和一分子当归酸的产物。也可能是3-氧-[β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-22-乙酸基-茶皂甙元A,为阿萨姆皂甙D脱掉一分子木糖,一分子阿拉伯糖、一分子半乳糖和一分子当归酸的产物。