用HPLC/MS法进行FNC在大鼠体内的药代动力学研究

作     者：彭有梅 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王庆端

授予年度：2012年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：2’-脱氧-2’-氟-4’-叠氮-核苷类似物 液相色谱-质谱联用 药代动力学 

摘      要：核苷类似物因其显著的抗病毒和抗癌活性及明确的作用机制吸引了众多有机化学家和药物化学家投入极大的热情和精力来寻找更安全有效的核苷类似物。2’-氟-4’-叠氮-核苷类似物（FNC）是一种新合成的抗病毒和抗肿瘤核苷类似物。FNC具有高效的抗艾滋病毒（HIV）和乙型肝炎病毒（HBV）的生物活性。FNC对多种人癌细胞系的体外研究表明FNC能够抑制细胞增殖,调节细胞周期和促进细胞凋亡;体内研究表明对肝癌、胃癌和肉瘤均具有良好的抗肿瘤活性和较低的毒性,为其进行深入研究奠定了良好基础。 药物代谢动力学主要是定量的研究药物通过各种途径进入体内的吸收、分布、代谢、排泄过程的“量时变化的动态规律,在客观评价药物的疗效与毒性、指导临床合理用药、合理设计最优给药方案等方面具有重要意义。FNC的含量测定可以采用紫外分光光度法和高效液相色谱法,但由于给药剂量小,血药浓度低,这些常规检测方法都无法满足生物样品微量测定的要求。为了解FNC在动物体内的代谢过程,本实验建立一种快速、准确的液相色谱-电喷雾离子-质谱联用（LC/MS）分析方法,测定大鼠体内FNC的药物含量,探讨其在大鼠体内的药代动力学特征。研究内容包括生物样品中FNC LC/MS分析方法的建立、血浆动力学、尿粪排泄和血浆蛋白结合率。 血浆样品中FNC LC/MS分析方法的建立 通过选择最佳色谱和质谱条件,建立了测定大鼠血浆样品中FNC的HPLC/MS方法,并对建立的分析方法进行确证。结果显示FNC在2-2000ng·mL-1浓度范围内线性关系良好（r2=0.9998）,定量限为2ng·mL-1,提取回收率在81.3%以上,日内和日间的RSD均小于13.11%。表明该方法灵敏度和准确度高,分析速度更快,并且成熟稳定,能够满足分析大量样品的需要。 FNC在大鼠体内的药物动力学研究 SD大鼠灌胃高、中、低三个剂量FNC（0.26、0.52、1.0mg-kg-1）,给药后不同时间点取血,LC/MS法测定FNC血药浓度,并用DAS3.0计算药代动力学参数,进行FNC在大鼠体内的药代动力学研究,结果显示：Cmax分别为（222.958±57）、（370.922±86）和（488.982±43）ng·mL-1;AUC0-∞分别为（5208.051±325）、（11242.902±507）和（19969.192±681）ng·h·mL-1, Cmax、AUC0-∞均随剂量增加而增加（p0.05）,t1/2Ka、t1/2Ke和CL不随剂量增加而明显改变（p0.05）,表明FNC在大鼠体内过程均符合一房室开放模型,在0.26-1.0mg·Kg-1的剂量范围内满足线性药物动力学的特点。 FNC在大鼠体内的排泄研究 采用HPLC/MS法测定给予FNC后不同时间段尿液和粪便中的浓度,计算其排泄量,揭示FNC在大鼠体内通过尿液和粪便排泄的经时变化规律。结果显示：灌胃给药后10.34%的FNC以原形的形式随尿液和粪便排出体外。 FNC的血浆蛋白结合率研究 本实验采用平衡透析法,在37℃条件下进行血浆蛋白结合率研究。利用LC/MS分析方法测定FNC在透析外液和血浆中的药物浓度,计算FNC的血浆蛋白结合率。结果显示：FNC与大鼠血浆蛋白的结合率为19.3-28.9%,平均值为25.43%,说明FNC与血浆蛋白结合程度较低,体内分布广泛,利于药物快速消除,有较好的安全性。