六君子汤含药血清对A549/DDP细胞E-cadherin和N-cadherin表达的影响

作     者：甄芳 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘春英

授予年度：2017年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：A549/DDP细胞株 TGF-β1 六君子汤含药血清 EMT 耐药逆转 

摘      要：目的:探讨六君子汤含药血清对人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂(DDP)耐药的作用及其对上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。材料与方法:采用血清药理学方法提取含药血清,采用随机分组法将40只SD大鼠分为四组:空白血清组和六君子汤含药血清高剂量组,六君子汤含药血清中剂量组,六君子汤含药血清低剂量组,灌胃给药时间间隔为24小时,持续给药5天,最后一天提取血清。再用培养基RPMI1640将各组血清分别稀释成浓度为5%和10%的含药血清,用预先配制好的含药血清干扰A549/DDP细胞株生长,其作用时间分别为12小时、24小时、48小时,以含药血清最高的生长抑制率为标准选择作为最佳含药血清的浓度,以及最佳含药血清的最佳作用时间点。MTT法:共分为4组:A549细胞+空白血清组,A549/DDP细胞+空白血清组,A549/DDP细胞+TGF-β1诱导空白血清组,A549/DDP细胞+TGF-β1诱导含药血清组,检测各组细胞对DDP的IC50,计算耐药逆转倍数;免疫细胞化学法和Western blot检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。结果:1.六君子汤含药血清对A549/DDP细胞的生长具有显著的抑制作用,且在一定范围内,浓度越高抑制效果越大,时间越长抑制率越高,选择中浓度的六君子汤含药血清作为干扰试剂,其稀释浓度选择10%,作用时间为48小时,此条件下的含药血清对于细胞毒性比较低。2.经过TGF-β1诱导的A549/DDP细胞比A549/DDP细胞对顺铂的耐药性显著增加,在最佳干预条件下,六君子汤含药血清耐药逆转倍数为4.12。3.六君子汤含药血清使A549/DDP细胞中的E-cadherin表达水平上调,N-cadherin的表达水平下调。结论:1.六君子汤含药血清可能通过抑制细胞上皮-间质转化来增强A549/DDP对DDP的敏感性,从而逆转降低A549/DDP细胞对顺铂的耐药程度。