YKL-40在气道上皮细胞的表达及其与Eotaxin、GM-CSF、IL-5相关性的研究

作     者：仇亚莉 

作者单位：南通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：贲素琴

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：气道上皮细胞 YKL-40 Eotaxin GM-CSF IL-5 支气管哮喘 

摘      要：目的本实验培养原代小鼠气道上皮细胞,观察鸡卵白蛋白(OVA)刺激小鼠气道上皮细胞24h、48h前后,YKL-40及气道-骨髓信号分子Eotaxin、GM-CSF、IL-5在气道上皮细胞中的蛋白及基因表达水平,且通过观察OVA刺激气道上皮细胞前后上述细胞因子表达水平变化的相关关系,初步探讨气道上皮细胞中YKL-40的表达情况及其可能在支气管哮喘的发生发展中的作用及机制。 方法分离并培养来源于C57BL/6小鼠的气道上皮细胞,对第3代细胞经形态学及细胞角蛋白免疫荧光染色法进行鉴定;以OVA刺激气道上皮细胞,提取OVA刺激前及刺激后24h、48h的细胞上清液,分别用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中YKL-40、Eotaxin、 GM-CSF及IL-5的蛋白含量;用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测气道上皮细胞中YKL-40的蛋白表达水平;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定性检测OVA刺激前及刺激24h、48h后气道上皮细胞中YKL-40、Eotaxin、GM-CSF及IL-5的基因表达水平;实时荧光定量PCR (RFQ-PCR)检测YKK-40在气道上皮细胞的基因表达水平。所得结果用SPSS18.0软件进行统计分析,以P0.05);相关性分析表明,YKL-40升高的水平与气道骨髓信号分子Eotaxin (r=0.9023, P0.01)、GM-CSF (r=0.8077, P0.01). IL-5(r=0.882, P0.01)水平呈正相关。 结论①原代培养小鼠气道上皮细胞24h、48h后上皮细胞及培养上清液中均可检测到YKL-40,证实气道上皮细胞可以分泌YKL-40;②OVA刺激后,气道上皮细胞YKL-40水平表达明显上调,提示哮喘状态下气道上皮细胞可以通过上调YKL-40表达参与支气管哮喘发病过程;③OVA刺激后,气道上皮细胞YKL-40mRNA及蛋白表达水平明显上调,且表达水平的变化与气道-骨髓信号分子Eotaxin、GM-CSF、IL-5呈正相关,提示抗原激发后YKL-40表达上调可能经由调控气道—骨髓信号分子Eotaxin、 GM-CSF、IL-5表达参与气道嗜酸性粒细胞炎症的形成。