金莲花的质量标准及UPLC指纹图谱和模式识别研究

作     者：雷蓉 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：冯丽

授予年度：2015年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：金莲花 质量标准 薄层色谱法 HPLC 指纹图谱 UPLC 聚类分析 主成分分析 

摘      要：金莲花为毛茛科植物金莲花(Trollius chinensis Bunge)的干燥花,始载于《本草纲目拾遗》,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤和抗氧化活性,可用于呼吸道感染、咽炎、扁桃体炎和支气管炎等症的治疗。我国境内的金莲花属植物约16种,其中短瓣金莲花(*** Reichb.)、阿尔泰金莲花(*** ***)、长瓣金莲花(*** ***)、川陕金莲花(***)、矮金莲花(***)和毛茛状金莲花(***)等在民间也常作药用。历版《中国药典》均未收载金莲花,地方标准中黑龙江省2001年版、上海市中药标准1994年版、部颁标准蒙药分册收载有金莲花,但其标准较为简单,无TLC鉴别项及含量测定项,质量标准不能控制药材质量。因此,对金莲花药材以及相关中药制剂的质量控制研究至关重要。金莲花的主要化学成分包括黄酮类、有机酸类和生物碱类。其中黄酮类成分最丰富,并且具有明显的生物活性,荭草苷和牡荆苷是其中含量最高两种黄酮碳苷类化合物,它们及其衍生物所占金莲花总黄酮的比例接近三分之二。荭草苷和牡荆苷被报道两者均具有明显的抗菌、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎和镇痛的药理活性。因此,荭草苷和牡荆苷可以用于对金莲花药材质量控制。本研究建立了中药材金莲花中荭草苷与牡荆苷的薄层鉴别方法和HPLC含量测定方法,为金莲花药材的质量控制提供了科学依据。并采用超高效液相(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)方法建立金莲花的指纹图谱,综合反映了不同基源的金莲花中主要成分的不同和含量差异,为金莲花内在质量特征评价和分类提供了依据。第一部分金莲花质量标准的研究目的:建立金莲花药材的质量控制方法。方法:薄层色谱法鉴别金莲花中的荭草苷和牡荆苷;高效液相色谱法测定金莲花中荭草苷和牡荆苷的含量,色谱柱为Shiseido Capcell pak C18 MGⅡ(4.6×250mm;5μm),乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速为1.0m L?min-1,检测波长为340 nm,温度为40℃。结果:薄层色谱鉴别,在与对照品相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。荭草苷在7.59～379.62μg/ml范围内,线性关系良好,回归方程为Y=25548.9728X+34229.8504,R2=0.9995,牡荆苷在2.31～115.50μg/ml范围内,线性关系良好,回归方程为Y=27760.6117X+10636.2063,R2=0.9996,精密度、重复性、稳定性良好,回收率在98～102%,RSD3%。结论:本标准中建立的方法能较好地控制本品的质量。第二部分金莲花UPLC指纹图谱和模式识别研究目的:建立金莲花药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱的质量评价方法。方法:以3种不同基源的金莲花药材为研究对象,采用RP-UPLC法,色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(100.0 mm×2.1 mm ID,1.7μm),乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速为0.3 m L?min-1,检测波长为340 nm,温度为45℃。结果:对38批样品进行测定,建立了金莲花药材的标准指纹图谱,采用对照品指认了荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷及牡荆苷3个色谱峰,采用聚类分析和主成分分析法对指纹图谱数据进行了模式识别研究,可很好地区分金莲花、短瓣金莲花和阿尔泰金莲花。结论:所建立的金莲花指纹图谱专属性强、方法快速、简便、可靠,可用于金莲花药材的质量控制及综合评价。