大蒜未受精子房离体培养的研究

作     者：刘颖颖 

作者单位：山东农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘世琦

授予年度：2013年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

主      题：大蒜 未受精子房 愈伤组织 单倍体 

摘      要：试验选取六个不同基因型的大蒜品种，分别进行大蒜花器官的培养，获得发育良好的大蒜子房。以大蒜未受精子房为试材，在适宜的培养条件下完成了愈伤组织的诱导及分化，获得了再生植株，建立了大蒜单倍体植株再生体系。此外还研究了大蒜未受精子房诱导愈伤组织的影响因素，进一步优化了大蒜子房培养技术体系。结果表明： 1大蒜子房愈伤组织诱导及分化需要适宜的培养基条件。以‘糙蒜’品种的未受精子房为试材进行离体培养，B5培养基及MS培养基上均能形成愈伤组织，B5培养基效果优于MS培养基;N6培养基不能诱导形成愈伤组织，不宜用于大蒜子房愈伤组织的诱导。诱导大蒜子房愈伤组织的适宜激素组合为2mg·L6-BA+1mg·LNAA，愈伤组织诱导率可达11.11%。在B5培养基上添加3mg·L6-BA+1mg·LNAA，不定芽的分化频率最高，可达46.15%。诱导生根的最佳培养基为B5+0.05mg·LNAA。 2低温预处理和短期热激处理均可提高大蒜子房愈伤组织的诱导率。以‘糙蒜’和‘正月早’开花前1d的未受精子房为试材，进行分别0(CK)、1、2、4、6d的4℃低温预处理和35℃0(CK)、12、24、36、48h的热激处理，发现4℃低温处理4d可明显提高愈伤组织的诱导率，35℃处理48h可显著提高诱导率。但经过热激处理的子房不论处理时间长短，褐化均较为严重，褐化率都在60%以上，不宜采用。 3基因型不同，子房愈伤组织的诱导情况不同。分别以‘糙蒜’、‘二水早’、‘蒲棵’、‘正月早’、‘红七星’六个不同品种的开花前1d的大蒜未受精子房为试材，发现糙蒜品种的子房愈伤组织诱导率最高，为11.11%;其次为‘正月早’、‘蒲棵’、‘红七星’、‘二季早’，‘二水早’的子房愈伤组织诱导率最低为0。 4子房发育程度对愈伤组织诱导有一定的影响。以‘糙蒜’、‘蒲棵’、‘正月早’三个品种的子房为试材，分别对开花当天、开花前2d、开花前6d的大蒜子房进行培养，发现三个品种均以开花当天的子房愈伤组织诱导率最高，诱导率分别为13.82%、8.00%和13.25%。 5以正常二倍体大蒜叶片为对照，利用流式细胞仪对再生植株进行倍性鉴定。研究发现，‘糙蒜’品种由愈伤组织诱导分化而成的16株再生植株中，14株为单倍体，其余2株为二倍体;由雌核发育胚途径产生的2株再生植株为单倍体。