食管癌细胞系Hedgehog信号通路研究

作     者：邱宗林 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：叶彬

授予年度：2011年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：Hedgehog信号 PTCH基因 HHIP基因 食管癌 细胞系 

摘      要：目的: 探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路PTCH1基因的突变及甲基化情况、Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系。 方法: 通过PCR扩增后直接测序的方法进行PTCH1基因的突变,采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH,PTCH1,SMO,HHIP和Gli的表达情况。用基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切、并结合荧光定量PCR方法分析食管癌细胞系PTCH1、HHIP基因启动子区甲基化状态,并检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理前后食管癌细胞系HHIP mRNA表达的变化。 结果: 在五个食管癌细胞系中没有检测到PTCH1基因突变和PTCH1基因甲基化。SHH、PTCH1、SMO和Gli mRNA在5个食管癌细胞系中都有较高表达。HHIP在Kyse450细胞系的表达较高,约为其余4个细胞系表达量的3-5倍。与之相应,Kyse450细胞HHIP基因CpG岛为非甲基化状态,其余4个细胞系CpG岛都发生了高甲基化。采用5-Aza-CdR去除甲基化后,HHIP基因表达较处理前增加了10-20倍。 结论: Hedgehog信号通路的异常激活可能参与了食管癌的发生发展过程,食管癌细胞系HHIP基因的表达抑制与其基因启动子区CpG岛高甲基化相关。