党参多糖对大鼠免疫活性的调节作用研究

作     者：许朋 

作者单位：遵义医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：余兰

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：党参 多糖 免疫调节 

摘      要：目的:以培养的大鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞为靶细胞构建体外免疫活性测试模型,在体外细胞上检测党参多糖(Codonopsis pilosula Polysaccharide,CPP)对大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖及相关细胞因子的影响,从而明确CPP的体外免疫调节活性;通过构建环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导免疫功能低下大鼠模型,在整体动物水平上检测CPP对免疫功能低下大鼠免疫功能的调节作用,明确CPP的体内免疫调节活性及作用机制,为CPP的开发和应用提供实验和理论依据。方法:以8周龄SPF级SD大鼠作为实验对象,分离大鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞,采用CCK-8法检测CPP对大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖的影响,通过乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)检测CPP对大鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用。构建免疫功能低下大鼠模型,称重法检测CPP对大鼠模型脾脏指数、胸腺指数的影响;HE染色法检测CPP对大鼠模型脾脏、胸腺组织形态的影响;ELISA检测CPP对大鼠模型分泌C3、C4、IgG、IgM、IgA的影响;RIA检测血清中相关激素(GH、T3、T4、INS)的变化;免疫组织化学染色法和Western-blot检测CPP对大鼠模型脾脏和胸腺Bax、Bcl-2、NF-κBp-p65蛋白表达水平的影响。结果:细胞实验结果(1)与对照相比,不同浓度CPP组(50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)均见大鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞活跃生长,并且具有处理时间和剂量依赖性(P0.05)。(3)与对照组相比,不同浓度CPP组巨噬细胞吞噬能力显著增强(P0.01)。(4)与对照组相比,不同浓度CPP组细胞TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6分泌能力增强(P0.05)。动物实验结果(1)与对照模型大鼠相比,不同浓度CPP组(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)大鼠脾脏和胸腺指数均有明显改善(P0.05-0.01),且具有剂量依赖性,以200 mg/kg作用最显著(P0.01)。(2)与对照模型大鼠相比,不同浓度CPP组(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)大鼠C3、C4、IgG、IgM、IgA、GH水平均有不同程度的增高(P0.05-0.01)。(3)与对照模型大鼠相比,不同浓度CPP组(50 mg/kg、100mg/kg、200 mg/kg)大鼠脾脏和胸腺Bax、NF-κBp-p65蛋白表达有不同程度减少(P0.05),而Bcl-2蛋白表达有不同程度的增加(P0.05)。结论:(1)CPP能增强大鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞的增殖、吞噬能力及其相关细胞因子TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6的分泌,从而提高大鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞的免疫活性。(2)CPP能增强免疫功能低下大鼠的脾脏指数、胸腺指数,说明CPP有保护机体免疫器官的功效。(3)CPP能提高免疫低下大鼠体内C3、C4、IgG、IgM、IgA分泌水平,说明CPP对大鼠体液免疫有调节作用。(4)CPP可能通过提高GH浓度,刺激大鼠脾脏淋巴细胞、腹腔巨噬细胞的增殖。(5)CPP对免疫功能低下大鼠的免疫调节活性,可能与其抑制免疫器官中凋亡相关蛋白Bax、NF-κBp-p65的表达、同时上调抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达有关。