不同粗饲料及蛋白质来源日粮条件下奶牛瘤胃细菌群落多样性变化

作     者：金迪 

作者单位：中国农业科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：卜登攀;王加启

授予年度：2013年

学科分类：090502[农学-动物营养与饲料科学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：日粮 粗饲料 蛋白质饲料 瘤胃细菌 DGGE qPCR 

摘      要：本研究的目的在于揭示不同粗饲料及蛋白质来源日粮对奶牛瘤胃细菌群落多样性的影响，并分析优势菌群的数量变化。选取48头泌乳日龄及体重相近的健康中国荷斯坦奶牛随机分为3组，饲喂粗饲料及蛋白质来源不同的三种日粮：MF组（苜蓿，玉米青贮及豆粕），CSA组（玉米秸秆，豆粕）和CSB组（玉米秸秆，棉籽粕和油菜籽粕）;其中，CSA组和MF组相比区别在于用玉米秸秆代替苜蓿和玉米青贮作为粗饲料来源;CSB组和CSA组相比区别在于用杂粕替代豆粕作为蛋白质饲料来源。所有奶牛在饲喂其指定日粮91天后全部换为MF组日粮。在试验期第31，61，91和107天，分晨饲前和晨饲后两个时间点，通过口腔采样器采集瘤胃内容物样品，进行不同粗饲料及蛋白质饲料降解相关菌群的比较。主要研究内容如下： 1.不同粗饲料和蛋白质来源日粮条件下奶牛瘤胃细菌群落多样性分析。提取不同时间点的瘤胃液样品总DNA，利用变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术分析细菌群落多样性变化，并对差异条带进行测序分析。DGGE分析结果表明，三个不同处理组的电泳图谱的条代数和峰密度值差异显著。聚类分析结果显示，在试验31天，混合粗饲料组（MF组）与单一秸秆组（CSA和CSB组）相比相似度仅51%，且MF组出现了更多特异性条带;与31天相比，试验第61天和91天的DGGE图谱的差异变小，相似度分别为53%和59%，表明瘤胃细菌对日粮的逐渐适应。但豆粕组（CSA组）和杂粕组（CSB组）的DGGE条带数和光密度值均差异不明显。多样性指数分析结果显示，对于试验第31天，61天晨饲后和91天的样品，MF组的香浓指数均高于（P0.05），即日粮粗饲料类型对R-UB有显著影响。 综上，日粮中苜蓿和秸秆两种不同粗饲料来源能够影响奶牛瘤胃细菌群落多样性，而豆粕和杂粕两种不同蛋白质来源对瘤胃细菌群落结构影响不显著;对于饲喂苜蓿、玉米青贮混合粗饲料的奶牛，其瘤胃细菌多样性丰富且存在特殊的细菌群落结构，未培养瘤胃细菌（群）R-UB丰富;验证结果证实R-UB在苜蓿和玉米青贮饲喂组数量高，在玉米秸秆饲喂组中相对缺少，表明R-UB与日粮中粗饲料纤维降解密切相关，其在混合粗饲料组为特异优势菌种。