不同月龄大鼠胰腺促性腺激素释放激素的表达及与糖代谢的关系

作     者：王立会 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姬秋和

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：GnRH OGTT IVGTT 胰岛素 实时荧光定量PCR 免疫组织化学 

摘      要：近年来，糖尿病在老年人群中的发病率不断升高，与年龄呈正相关。据统计，糖尿病在60～70岁年龄组的发病率可高达20%，且呈现随年龄逐渐增加的趋势。然而，糖代谢随年龄增长发生异常的具体进程及机制如何，值得研究。同时，临床观察发现应用促性激素释放激素GnRH类似物治疗生殖系统疾病时，可使患者出现多种代谢紊乱，例如骨质疏松、2型糖尿病(T2DM)、胰岛素抵抗(IR)、心血管疾病(CVD)等，此提示我们GnRH与糖代谢异常存在一定的关系。同时，随着年龄的增长，大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的GnRH基因存在低表达，GnRH神经元的电生理活动明显减弱，其合成和运输蛋白的功能减退。我们的前期工作证明：胰腺系统存在GnRH及其受体，但其在胰腺随年龄表达的变化尚未见报道，其在胰腺表达是否随年龄发生同样的变化，以及这种变化是否与年龄增长的糖代谢异常增加有关，为本实验的目的。 目的： 观察不同月龄大鼠血糖和胰岛素(Ins)水平的变化，检测其胰腺GnRHmRNA表达水平，分析两者之间的相关性，初步探讨胰腺GnRH表达与老年性糖代谢异常发生的关系，为进一步研究其在糖代谢紊乱发生和发展中的作用奠定基础。 方法： Wistar大鼠按鼠龄分为：幼年组(1月)，中年组(7月)，老年组(14-16月)，每组7-8只。口服糖耐量实验(Oral Glucose Tolerance Test, OGTT)和静脉葡萄糖实验（Intravenous Glucose Tolerance Test, IVGTT）检测各点血糖、胰岛素及相关指标;免疫组织化学法定位;实时定量PCR方法(SYBR Green法)检测胰腺GnRH mRNA的表达。 结果： 1、OGTT：老年组60min、120min血糖和Ins水平均高于其余两组，具有统计学差异(P 0.01);老年组胰岛素抵抗指数HOMA-IR、胰岛素分泌指数△I30/△G30、△I120/△G120、AUCI/AUCG均高于其余两组，具有统计学差异(P 0.01)。 2、IVGTT：老年组在糖负荷后5、30、60、120min血糖值明显高于其余两组，糖负荷后Ins5、10、15min低于其余两组(P 0.05)，120min Ins则高于其余两组(P 0.05)，老年组第一时相分泌指数△I5/△G5、急速胰岛素反应指数AIR、AUCI(0-10min)、AUCI(0-30min)、AUCI(0-120min)低于其余两组(P0.01)，AUCG(0-30min)、AUCG(0-120min)高于其余两组(P 0.05)，以上数据显示：老年鼠存在Ins第一时相分泌不足，胰岛素高峰延迟。 3、免疫组织化学：三组大鼠GnRH、GnRH-R反应阳性细胞分布情况相同，老年大鼠GnRH、GnRH-R反应阳性细胞有所减少(见附录图5-6)，同时其胰岛有所减小。 4、RT-PCR：老年组GnRH mRNA表达显著低于幼年组和中年组，P0.01。 5、相关性分析：5.1 GnRH mRNA相对表达量与OGTT指标的相关性分析：所有大鼠中(n=21)GnRH mRNA表达水平与空腹、120min血糖均呈负相关，相关系数分别为-0.628(P 0.01)和-0.889(P 0.05);与空腹、120min胰岛素亦呈负相关，相关系数分别为-0.636(P 0.01)和-0.874(P 0.01);与△I30/△G30(r = -0.573，P 0.05)、△I120/△G120 (r = -0.67，P 0.05)、HOMA-IR(r = -0.718，P 0.05)均呈负相关。 5.2 GnRH mRNA相对表达量与IVGTT指标的相关性分析：GnRH mRNA表达水平与5min血糖呈负相关(r = -0.782，P 0.05)，与5min胰岛素(r = 0.869，P 0.05)、△I5/△G5(r = 0.843，P 0.05)呈正相关，n=21。 结论： 老龄大鼠的血糖平均水平升高，Ins第一时相分泌不足，高峰分泌延迟;同时，胰腺GnRH mRNA表达水平下降，且与0min、120min血糖和Ins水平呈负相关、与胰岛素第一时相分泌呈正相关，提示胰腺GnRH表达的改变可能与老年性糖代谢异常的发生有关，其相关机制有待进一步研究。