三个miniSTR基因座荧光标记复合扩增体系的建立及其法医学应用研究

作     者：蒋师 

作者单位：四川大学 

学位级别：硕士

导师姓名：侯一平

授予年度：2007年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 0838[工学-公安技术] 100105[医学-法医学] 10[医学] 

主      题：法医遗传学 miniSTR 复合扩增 毛细管电泳 D19S591 D2S2944 D18S872 

摘      要：目的本课题旨在建立新的miniSTR荧光标记复合扩增体系，并按照美国DNA分析方法技术工作组(TWGDAM)的指导方案，进行法医学应用性研究。方法从已有国内频率资料的STR基因座中筛选出可用于设计MiniSTR引物的基因座，进行引物设计;用未标记的新引物在银染显色方法下进行复合扩增实验，选出复合成功基因座定购荧光标记引物;制作等位基因分型标准物;采用美国ABI310遗传分析仪进行荧光标记引物复合扩增试验，并优化扩增条件，对不同退火温度下复合扩增的效果进行研究;对复合扩增系统的灵敏度、基因座的种属特异性、案例应用、降解模型、陈旧样本等法医学应用进行研究。结果成功设计了D19S591，D2S2944，D18S872基因座的小于130bp的miniSTR扩增引物，成功建立了D19S591，D2S2944，D18S872的miniSTR荧光标记复合扩增体系。这一扩增体系条件易于优化，采用国产Taq酶进行扩增，即可得到满意的扩增产物和分型结果。相对于国外昂贵的试剂盒，它是一种成本低廉但效率高的STR基因座复合扩增体系。法医学应用性研究表明：三个基因座有较高的种属特异性;该体系的检测灵敏度为0．25ng模板DNA;通过6个实际检案证明，该体系能用于法医学个人识别和亲权鉴定;通过对陈旧样本和降解模型的研究证明，该体系对降解检材有良好的扩增效果，较常规大片段试剂盒扩增成功率高，可用于常规试剂盒扩增失败的降解样本的分型。结论D19S591，D2S2944，D185872的miniSTR荧光标记复合扩增体系可应用ABI-310检测平台，获得可靠的遗传学数据。该体系扩增条件易于优化，成本低廉，分型结果稳定，种属特异性好，灵敏度和准确度高，对降解检材扩增成功率高，可以应用于法医学实际检案，特别适合对陈旧样本和降解检材的法医学检测。