地塞米松对宫内感染致胎鼠脑组织TNF-α、S-100表达及脑白质损伤影响的实验研究

作     者：刘艳兵 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈晓

授予年度：2013年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：宫内感染 脑白质损伤 地塞米松 TNF-α S-100 

摘      要：目的： 1、研究宫内感染致胎鼠脑组织肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-α)及S-100蛋白(S-100)表达的影响，探讨TNF-α、S-100在宫内感染致胎鼠脑白质病变中的作用。 2、研究地塞米松(Dexamethasone,Dex)对宫内感染致胎鼠脑组织TNF-α、S-100蛋白水平的影响，探讨Dex对宫内感染致胎鼠脑白质病变的保护作用。 方法： 1、实验分组：40只清洁级健康成年SD大鼠(雄性10只，雌性30只，雌性体重：20050g，雄性体重：30050g)置于室温18℃～20℃，相对湿度40％～70％的动物房内饲养,适应环境一周后，于下午17:00将雌、雄大鼠按3：1合笼饲养，次日上午06:00观察，以观察到阴栓之日定为受孕第一天，然后将孕鼠随机分为以下三组：即对照组(生理盐水组)、LPS组(宫内感染组)、Dex干预组(地塞米松干预组)，每组各10只孕鼠。 2、模型制作及药物干预：参照Bell等人的方法，通过给孕鼠腹腔内注射脂多糖(LPS)造成孕鼠宫内感染模型。LPS组孕鼠在孕第17、18天连续2天腹腔注射LPS350μg/kg;Dex干预组孕鼠在孕第17、18天连续2天腹腔注射LPS350μg/kg，1小时后腹腔注射Dex0.5mg/kg;对照组在相同时间点给予等容积的生理盐水。术后将各组孕鼠置于清洁饲养笼内，常规饲养。 3、观测指标：观察各组孕鼠注药后的一般情况，是否有流产、死产等现象，记录新生鼠及胎鼠只数、测量胎鼠体重与脑重;各组均于第2天注药后3小时、6小时、24小时、48小时四个时间点，取8只胎鼠(至少来自2只不同的孕鼠)，将胎鼠处死后取胎鼠脑组织，后将孕鼠处死，取胎盘和子宫，均做HE染色，光镜下观察胎鼠脑组织、胎盘和子宫病理形态学改变;应用S-P免疫组化法分别检测三组各时间点胎鼠脑组织TNF-α、S-100蛋白的动态变化。 结果： 1.孕鼠一般情况及分娩情况：三组孕鼠注药后均进食、活动正常，无孕鼠死亡。对照组孕鼠无死产、死胎及流产，共获胎鼠99只;LPS组死产数为2只，死胎数为7只，无流产，共获新生鼠及胎鼠86只;Dex干预组死胎数为1只，无死产及流产，共获新生鼠及胎鼠91只。 2、各组胎鼠体重和脑重的变化：LPS组注药后3h、6h、24h、48h胎鼠体重及脑重与对照组比较均明显降低(P0.05)。 3、胎盘及子宫病理形态改变：LPS组注药后孕鼠胎盘及子宫内充血、水肿，并见大量中性粒细胞浸润;Dex干预组胎盘及子宫内充血、水肿，炎性浸润较LPS组减轻;对照组胎盘及子宫病理形态学上未观察到明显炎症反应。 4、胎鼠脑组织病理形态改变：LPS组胎鼠脑组织出现神经细胞水肿，胞质淡染，核染色不清，白质内神经纤维走向紊乱，粗细不均，结构疏松呈筛网状;Dex干预组相比LPS组胎鼠脑组织细胞水肿，出血，白质损伤等改变均有不同程度的减轻;对照组胎鼠脑组织神经细胞形态结构完整，布局有序，核淡，核仁清楚。 5、各组不同时间点胎鼠脑组织TNF-ɑ和S-100蛋白的表达：LPS组注药后3h、6h、24h、48h胎鼠脑组织TNF-ɑ、S-100蛋白表达水平与对照组比较显著升高(P0.01);Dex干预组注药后3h、6h、24h、48h胎鼠脑组织TNF-ɑ、S-100蛋白表达水平与LPS组比较显著减低(P0.01)，而与对照组相比明显升高(P0.01)。 6、TNF-ɑ与S-100蛋白相关性分析：对脑组织中宫内感染及Dex干预后TNF-α与S-100进行相关性分析：宫内感染后测得r=0.547， P0.01;Dex干预后r=0.843，P0.01;TNF-α与S-100蛋白之间存在明显正相关性。 结论： 1、孕17、18天大鼠腹腔内注射LPS建立的宫内感染大鼠模型导致胎鼠体重、脑重降低，胎鼠脑组织神经细胞数量减少、水肿，白质内神经纤维紊乱，粗细不均，并有局灶性出血，提示宫内感染可导致胎鼠脑组织损伤，发生脑白质病变。 2、宫内感染后，胎鼠脑组织内细胞因子TNF-ɑ、S-100蛋白的表达增加，提示由宫内感染导致的细胞因子反应在脑白质损伤的发生、发展中可能起重要作用。 3、宫内感染后，胎鼠脑组织内细胞因子TNF-α与S-100蛋白表达变化趋势基本一致，呈正相关，表明TNF-α与S-100蛋白在宫内感染致脑白质病变中具有协同作用。 4、宫内感染后，Dex干预可使胎鼠脑组织内细胞因子TNF-ɑ与S-100蛋白表达下降，胎鼠脑组织病理可见脑白质损伤减轻，提示地塞米松对宫内感染致脑白质损伤具有一定的保护作用。