中药水煎液中还原糖两步衍生化测定方法的研究

作     者：王鑫娜 

作者单位：西北大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘建利

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：中药水煎液 还原糖 两步衍生化 高效液相色谱 含量测定 

摘      要：糖类不仅是植物生命活动的能源物质和骨架成分,而且具有抗辐射、抗肿瘤、抗病毒及免疫调节等多种药理作用。因此糖类物质的定量、定性以及结构分析成为当前研究的重点。由于糖的种类多、极性大、结构相似,且无紫外或荧光吸收基团,一般要先通过化学标记将其转化为具有紫外或荧光吸收的衍生物,再对其进行测定。然而目前所报道的大多数衍生化试剂在对还原糖进行直接标记时,会破坏还原糖环状结构的完整性,导致糖失去本身构型,衍生所得的产物与原来的糖存在着明显差异,从而使某些还原糖无法得到分离而影响测定。本文旨在建立一种新的还原糖两步衍生化方法克服这一难题,即采用乙酰丙酮先与还原糖在弱碱条件下生成糖苷酮,保留糖环状结构的完整性;再与2,4-二硝基苯肼在酸性体系中生成糖酮腙衍生物后进行HPLC分析。对此,取得了以下的研究成果和结论:(1)通过对衍生化条件和色谱条件的优化以及含量测定的一系列方法学考察,结果表明本文所建立的柱前两步衍生化HPLC法可用于中药水煎液中木糖、果糖、葡萄糖、乳糖等8种还原糖的分析测定。该法克服了大多数衍生化试剂无法修饰果糖,和直接衍生化造成单糖结构开环,使部分糖因失去构型而无法得到分离的问题。(2)用已建立的方法对71种常用中药中还原糖进行了测定。分别从中药所含还原糖种类及含量差异、中药药理活性、中药药用部位、中药药性及中药分类等方面探究与中药中所含还原糖种类及含量之间的关系。结果表明,中药所含还原糖种类及含量与中药药理活性和中药药用部位有关,而与中药药性及中药的分类无关。(3)首次对决明子、喜树、槐树、毛豆及女贞子各部位中还原糖的分布及晒干前后的还原糖含量变化进行了测定。结果显示葡萄糖在各药材叶中的含量最高,其次是茎;在药材晒干过程中,麦芽糖和乳糖发生了部分降解,含量降低,而葡萄糖和半乳糖含量升高。(4)用该法测定了成熟柿果中还原糖的种类及含量,测定结果与报道的基本一致,表明该法除了可以用于中药水煎液中还原糖的测定,还可用于柿果样本中还原糖的测定,进一步拓宽了该方法的应用范围。(5)本文除测定了已知的还原糖种类及含量外,还总结了所测样品中部分未知还原糖出峰情况,这将为后续进一步研究提供参考依据。