芳香烃受体及相关基因在人皮脂腺细胞上表达及其意义的研究

作     者：余茜 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：鞠强;宋宁静

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学] 

主      题：氯痤疮 芳香烃受体 芳香烃受体核转运蛋白 B淋巴细胞终极分化的主调控子细胞色素P4501A1 

摘      要：现代工业的飞速发展，给人类社会带来了空前的进步，但是由此产生的废物也使人类付出了巨大的健康代价。二噁英是工业生产中的副产物，目前被认为是环境污染物的代表。作为多氯代二苯-对-二噁英（polychlorinated dibenzo-p-dioxins）类化合物的简称，二噁英大约有75种异构体，其中2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, TCDD）是代表性化合物，目前研究证实其具有生殖毒性、致癌性、免疫毒性、内分泌毒性及皮肤毒性等毒理学作用，对人体的健康产生了深远的影响，因此研究TCDD对人体的毒性作用受到国际社会和医学界的高度重视。 氯痤疮是一种以粉刺和囊肿为主要表现的好发于面部的毛囊皮脂腺单位的痤疮亚型，也是二噁英中毒最敏感和最可靠的标志。目前氯痤疮发病的分子机制尚不明确，与寻常痤疮不同是氯痤疮以皮脂腺萎缩和脂质分泌减少为主要的临床特征，其组织病理学表现为：毛囊漏斗部及皮脂腺导管增生和角化过度，导致粉刺和小囊肿形成、毛囊结构消失，皮脂腺及汗腺萎缩并被角化表皮细胞取代。因此，阐明二噁英与皮脂腺分化及脂质合成的关系对揭示氯痤疮的发病机制有重要意义。课题组先前的研究在国际上首次体外证明了二噁英通过激活芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor,AhR）诱导了人皮脂腺细胞系向角质形成细胞系的转化是氯痤疮发生重要机制。我们在此基础上进一步研究TCDD通过何种信号分子途径诱导了皮脂腺细胞的异常分化。 二噁英的细胞毒性效应大部分是通过AhR信号途径介导的，作为AhR的配体，芳香烃受体核转运蛋白（Ah receptor nuclear translocatorprotein， ARNT）与AhR形成AhR/ARNT异二聚体后，激活了下游靶位基因。然而AhR的下游靶位基因众多，其中细胞色素P4501A1（Cytochrome P4501A1, CYP1A1）在许多细胞上被认为是AhR信号途径经典下游靶位基因;而近年来B-淋巴细胞终极分化的主调控子（Blymphocyte-induced maturation protein1, Blimp1）又作为AhR非经典信号途径的一个新的靶基因受到关注。因此，我们推测TCDD是通过AhR/ARNT信号转导途径，激活了下游靶位基因CYP1A1、Blimp1的表达，介导了人皮脂腺的异常分化。 目的 采用体外培养的永生化SZ95人皮脂腺细胞以及体外培养的人活体皮肤组织为研究模型，研究AhR、ARNT、CYP1A1和Blimp1蛋白在体外培养的人SZ95皮脂腺细胞和人皮肤组织中表达的情况并在TCDD的作用后检测上述基因表达的变化情况。初步探讨TCDD细胞毒性的信号转导机制以及TCDD激活的下游靶位基因。为揭示二噁英影响人皮脂腺细胞异常分化的细胞内分子信号途径及氯痤疮发生的分子机制提供进一步证据。 方法 ①细胞免疫组化法检测SZ95人皮脂腺细胞中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白表达情况及在10nM TCDD作用3d后上述基因的表达变化情况;②蛋白印迹法检测SZ95人皮脂腺细胞中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白表达情况及在10nM TCDD作用3d后上述基因的表达变化情况;③免疫组化法检测人面部皮脂腺组织中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白表达情况及在10nM TCDD作用3d后上述基因的表达变化情况;④皮肤组织HE染色法研究10nM TCDD作用前后人面部皮脂腺组织7d后皮脂腺组织的形态学变化情况。 结果 ①细胞免疫组化法显示AhR蛋白主要表达于SZ95人皮脂腺细胞胞浆中，ARNT蛋白主要表达于细胞核内，CYP1A1蛋白主要表达于细胞胞浆中，Blimp1蛋白主要表达于细胞胞核内;在10nM TCDD作用3d后，SZ95人皮脂腺细胞中AhR蛋白的表达下降，ARNT蛋白的表达升高，CYP1A1蛋白的表达升高，Blimp1蛋白的表达升高;②蛋白印迹法显示在10nM TCDD作用3d后，SZ95人皮脂腺细胞内AhR蛋白相对定量值（0.153±0.025）与未加药的阴性对照组（0.343±0.021）相比较，实验组中AhR蛋白的表达降低;ARNT蛋白相对定量值（2.090±0.362）与未加药的阴性对照组（0.997±0.156）相比较，实验组中ARNT蛋白的表达升高;CYP1A1蛋白相对定量值（4.233±0.252）与未加药的阴性对照组（0.123±0.208）相比较，实验组中CYP1A1蛋白表达明显升高;Blimp1蛋白相对定量值（2.930±0.058）与未加药的阴性对照组（0.440±0.036）相比较，实验组中Blimp1蛋白的表达明显升高。差异均有统计学意义（P0.05）。