IL-22介导肿瘤细胞MAPK通路及细胞增殖

作     者：潘芹 

作者单位：扬州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孟松树

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：IL-22 MAPK通路 细胞增殖 

摘      要：IL-22是在以IL-9刺激的T细胞小鼠瘤细胞BW5147中发现的一种新型细胞因子,是IL-10家族中的一名新成员,与IL-10的氨基酸同源性为22%。IL-22由活性T细胞(主要包括Th17和Th1细胞)产生,并通过与IL-22受体蛋白的结合来发挥其生物学功能。IL-22受体复合物由两条受体链构成:IL-22R1和IL-10R2,它们均属于Ⅱ型的细胞因子受体家族。其中,IL-22R1是IL-22特异性结合的蛋白分子,而IL-10R2是IL-10受体复合物和IL-22受体复合物间的共用链。IL-22与其受体复合物结合后主要通过Jak-STAT通路转导活化信号。Jak1、Tyk2的活化导致STAT1、STAT3、STAT5的酪氨酸残基磷酸化。此外,IL-22也可激活3条主要的MAPK通路:MEK-ERK、JNK/SAPK和p38激酶途径。 IL-22作为一种新型的细胞因子,在细胞中参与多条信号通路,发挥着多种生物学功能。虽然IL-22的多种生物学功能,如参与炎症反应、先天免疫系统的激活、细胞增殖和分化及基因表达已有报道,但IL-22在肿瘤细胞中的潜在生物学效应还未深入研究。因此,本实验主要以人结肠癌细胞株SW480和人肺癌细胞株A549为研究对象,研究IL-22介导肿瘤细胞的相关信号通路,为进一步研究IL-22与肿瘤发生发展关系等方面提供了理论基础。方法 1、Western印迹检测IL-22对肿瘤细胞中MAPK通路中相关蛋白ERK1/2、Src(416)、JNK、p38及其他信号蛋白STAT3、AKT等的活化及抑制效果。 2、免疫共沉淀法检测IL-22活化MAPK的过程中Gab1的磷酸化及其与SHP2的结合。 3、WST-1法观察IL-22对肿瘤细胞株SW480细胞增殖的影响。 结果 1、IL-22结合其受体复合物能诱导MAPK通路中相关蛋白ERK1/2、Src(416)、JNK、p38及其他信号蛋白STAT3、AKT等的活化。 2、以100ng/ml的IL-22刺激SW480细胞,Gab1的磷酸化水平显著增强,且SHP2也被结合到磷酸化的Gab1。对SW480细胞的进一步研究结果显示,IL-22能诱导IL-22R1的磷酸化,且将SHP2招募到磷酸化的IL-22R1上,即SHP2与IL-22R1相结合。此结果说明Gab1及SHP2可能参与IL-22介导的信号转导通路。 3、IL-22能刺激SW480细胞增殖,相对细胞增长率为15%。