荔枝高频率体细胞胚胎发生及植株再生研究

作     者：邓朝军 

作者单位：湖南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：易干军;张秋明

授予年度：2005年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

主      题：荔枝 体胚发生 细胞学 炼苗 胚性愈伤组织 

摘      要：荔枝(Litchi chinesis Sonn.)属无患子科(Sapindaceae)荔枝属(Litchi Sonn.),原产中国,是我国南方著名的亚热带果树。由于荔枝离体培养比较困难,使之在生物技术领域的研究进展缓慢。本研究在已有研究的基础上,自2003年7月至今,对妃子笑、水东、海艮二号、三山尖叶荔等荔枝品种花药的胚性愈伤组织诱导、保存及诱导植株再生进行深入研究,以期为荔枝的生物技术基础理论研究、生物技术育种、工厂化育苗等提供理论基础和技术支持。 主要的研究结果如下: 1.通过对几个荔枝品种的花药进行诱导,得到妃子笑、水东、三山尖叶荔等品种的胚性愈伤组织和海艮二号的非胚性愈伤组织。筛选出比较适合荔枝花药诱导出愈伤组织的培养基组合为MS+2,4-D2.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP500mg/L+蔗糖50g/L。 2.应用荔枝花药诱导出来的愈伤组织进行保存,结果表明:用/dS+NAA3.0mg/L+BA1.0mg/L+蔗糖6%(4-5代)+琼脂6.8g/L→MS无激素培养基(1-2代,其中有一次使用液体培养)→MS+NAA3.0mg/L+BA1.0mg/L+蔗糖6%+琼脂6.8g/L(4-5代)循环继代的技术路线,可以较好的保存水东和妃子笑的胚性愈伤组织,愈伤组织的胚性也不会因继代次数的增加而减弱,但海艮二号却有非胚性向胚性愈伤组织转化的迹象。 3.对胚性愈伤组织生长状态好的胚性愈伤组织进行体胚的诱导,结果表明水东用MS+BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖6%+琼脂10g/L+水解乳蛋白500mg/L+蜂皇浆400mg/L效果较好,而妃子笑的则用MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8g/L+活性碳0.5%效果明显,从中可以说明荔枝体胚的诱导与基因型有较大的关系。在实验中还发现用液体悬浮培养的胚性愈伤组织所产生的体胚比用固体培养的胚性愈伤组织诱导的体胚好,体胚生长一致、畸形胚少。 4.应用石蜡切片法观察荔枝胚性愈伤组织结构以及体胚发生过程,可以看出荔枝的体胚发生过程经历了球形、心形、鱼雷形、子叶形的体胚发生;并对胚性愈伤与非胚性愈伤进行细胞学上的比较,胚性愈伤组织具有核大、质浓、染色深、细胞排列紧密的特点。