溃结安对大鼠溃疡性结肠炎模型中NF-κB基因表达的影响及RNAi技术平台的建立

作     者：黄国虹 

作者单位：新疆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：库热西·玉努斯

授予年度：2007年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：溃疡性结肠炎 维药西帕依溃结安 核转录因子-κB RNA干扰 

摘      要：目的:研究维药西帕依溃结安对大鼠溃疡性结肠炎模型NF-κB基因表达的影响,建立RNAi技术平台,探讨溃疡性结肠炎发病的敏感点及维药西帕依溃结安治疗溃疡性结肠炎的作用靶点。方法:实验动物分为正常组,溃疡性结肠炎模型组,西帕依溃结安干预组,5-氨基水杨酸(5-ASA)阳性对照组,生理盐水(NS)阴性对照组;采用DNCB和乙酸复合法建立大鼠溃疡性结肠炎模型;通过半定量RT-PCR分析NF-κd mRNA的表达水平;克隆大鼠NF-κB的完整编码区,与pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体连接,构建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-NF-κB真核表达载体:设计针对NF-κB基因的siRNA模板与pSilencer 1.0-U6载体连接,构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-NF-κB干扰载体;通过脂质体转染方法,在COS-7细胞中表达NF-κB-GFP融合蛋白,应用干扰载体进行调节,经倒置荧光显微镜及Westemblot检测NF-κB-GFP融合蛋白的表达,筛选有效的siRNA。结果:模型组中大鼠的症状、体征、结肠组织大体标本、病理切片均符合溃疡性结肠炎模型建立的标准;与正常组相比,模型组中NF-κB mRNA表达水平升高;与模型组相比,西帕依溃结安干预组、生理盐水阴性对照组、5-ASA阳性对照组NF-κB mRNA表达水平均降低,且具有统计学意义(P0.05);但西帕依溃结安干预组与生理盐水阴性对照组之间无统计学意义(P0.05)。倒置萤光显微镜及Western blot结果显示随着pSilencer 1.0-U6-siRNA-NF-κB干扰载体量的增加,NF-κB-GFP融合蛋白在COS-7细胞内表达水平降低,并筛选出有效的siRNA。结论:NF-κB与溃疡性结肠炎发病有关,但它可能不是维药西帕依溃结安治疗溃疡性结肠炎的直接作用靶点;应用RNAi技术成功调节NF-κB基因表达,建立了RNAi技术平台,本研究的成功为整个课题的顺利进展奠定基础。