中国对虾组织蛋白酶L和溶菌酶的重组表达及性质研究

作     者：卜兴江 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王金星

授予年度：2006年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：中国对虾 组织蛋白酶L 溶菌酶 重组表达 

摘      要：中国对虾是我国重要的海产养殖品种，它不仅肉质鲜美，而且营养丰富，广受人们的喜爱。但随着集约化高密度养殖以及养殖规模的不断扩大，自上世纪90年代以来，对虾疾病频繁爆发，使海产养殖业遭受巨大损失。虽然国内外许多科研工作者在对虾疾病防治方面做了大量的工作，并且取得了许多进展;但由于对虾免疫防御机制的研究起步较晚，且研究的不是很深入;所以迄今为止，对虾疾病仍然是困扰对虾养殖业的一个难题。要解决这一问题除了改善对虾的养殖环境外，提高其自身免疫力和抗病力也是抵抗对虾疾病的重要途径。 组织蛋白酶L是动物、植物和微生物中含量非常丰富的一类半胱氨酸蛋白酶，它不仅参与生物体内各种蛋白水解，还参与许多重要的生命活动，如抗原呈递、肿瘤入侵和转移、骨质吸收、细胞凋亡等。在甲壳类动物中，对组织蛋白酶L的功能了解的还不多，值得进一步研究。 溶菌酶是一种能水解粘多糖的碱性酶，它能催化细菌细胞壁中粘多糖N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4糖苷键的水解，导致细菌细胞壁破裂、内容物逸出而使细菌死亡。溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的组成部分，参与机体多种免疫反应，能改善和增强巨噬细胞吞噬能力和消化功能，在溶菌过程中形成一个水解体系，破坏和消除侵入体内的异物，从而实现机体的免疫防御。 本实验室已从中国对虾中克隆得到组织蛋白酶L(FCL)和溶菌酶(FLYZ)的基因。为了进一步了解其功能，本论文将这两种基因作了重组表达和性质的研究，主要研究结果如下： 1．中国对虾组织蛋白酶L在大肠杆菌中的重组表达和性质研究。以中国对虾的肝胰腺cDNA为模板，扩增FCL基因，并成功构建了FCL-pET-30a(+)重组质粒，转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)，得到了转化了，成功地进行了诱导表达，表达量占细菌总蛋白的40％，并用亲和纯化的方法对重组蛋白进行了纯化，纯化得率为111.67 mg／L。用制备的兔抗FCL的抗血清做了Westernblotting试验，结果显示组织蛋白酶L在中国对虾的肝、胃、肠中有表达，而在卵